0 次观看 • 3:13 分钟 • August 29th, 2025
取含有目的基因用于转导的病毒与示踪染料在缓冲液中的混合物。
将病毒-染料混合物吸入细尖毛细管中。
取一只腹部脱毛的麻醉后怀孕小鼠。
用乙醇对皮肤进行消毒，随后使用碘伏溶液。
沿中线做切口以暴露腹腔，并在腹腔上方覆盖一层石蜡膜。
暴露子宫角，并在其上倾倒缓冲液以防止干燥。
注意胚胎的顺序和位置。调整胚胎在子宫囊内的位置，以暴露注射位点。
将病毒-染料混合物注射到脊髓和脑室中。
通过观察染料分布情况，确保准确注射。
将子宫角放回腹腔，并加入一些缓冲液。
缝合腹腔，然后缝合皮肤。
注入的病毒进入宿主细胞，释放目标基因并使其表达。
首先，将含有 4 × 10¹¹ 个腺相关病毒 1 型（adeno-associated virus type 1）病毒颗粒的定制毛细管尖端装载到吸管上，该病毒颗粒已包被目标物质并用 Fast Green 染料标记。向毛细管中加入 15 µL 标记的腺相关病毒颗粒。
接着，确认麻醉后的妊娠14.5天小鼠对脚趾夹捏无反应，并对皮肤进行消毒。使用带锯齿的弯虹膜镊和直的碳化钨手术剪，沿腹中线（linea mediana）做皮肤切口。用直头杜蒙镊夹住腹膜壁，继续使用直头瓦纳斯剪沿白线（linea alba）剪开，将一片带窗的石蜡膜覆盖在腹腔开口上，然后使用勺状器械暴露子宫角，注意避免损伤子宫角内的胚胎。
在子宫角上滴加几滴37°C的PBS后，检查子宫囊内胚胎是否有损伤或畸形。小心地在子宫囊内转动胚胎，直至达到每次注射所需的位置。当胚胎定位完成后，向每个胚胎注射一到两微升Fast Green标记的病毒颗粒溶液。
所有胚胎注射完成后，将子宫角放回腹腔，并向腹腔内加入几滴37°C的PBS。然后使用6-0号聚酰胺缝线缝合腹膜壁，使用3-0号聚酰胺缝线和哈尔斯特德蚊式止血钳缝合皮肤。