0 次观看 • 3:40 分钟 • August 29th, 2025
从荧光标记的诱导多能干细胞来源的神经前体细胞（NPCs）开始。
将细胞重悬于细胞外基质水凝胶中，以制备均匀的细胞-基质混合物。
将混合物置于冰上孵育。
接下来，将一个人类脑类器官转移至培养皿中。
去除多余的培养基，将培养皿置于显微镜下进行注射操作。
将细胞-基质混合物滴加到预冷的无菌玻片上，并使用预冷的注射器吸除。
缓慢将混合物注入类器官表面，以尽量减少对组织的损伤。
让类器官短暂静置，然后加入培养基，将类器官转移至多孔板中，并进行培养。
水凝胶固化，将神经前体细胞固定在注射部位。使用荧光显微镜追踪神经前体细胞。
随着时间的推移，神经前体细胞增殖并迁移至类器官的远端区域，在这些区域分化为未成熟和成熟的神经元。
这能够实现可靠的细胞移植，同时将类器官的损伤降至最低，适用于神经细胞治疗。
首先将诱导多能干细胞或iPSC来源的神经前体细胞（NPCs）的单细胞悬液从冰上取出，在4摄氏度下以300g离心5分钟。
弃去上清液，将细胞沉淀重悬于3毫克/毫升的溶解型基底膜基质中，以获得每注射2微升的终体积。立即将悬液放回冰上，直至使用。将预冷的注射器从20摄氏度冰箱转移至冰桶中，以备后续使用。
接下来，将脑类器官培养板从培养箱中取出，使用宽口吸头将类器官转移至35毫米培养皿中。为稳定类器官并便于注射，尽可能吸除培养基，注意避免损伤类器官。将含有类器官的35毫米培养皿置于体视显微镜下，以利于进行注射操作。
当类器官准备注射时，使用预冷的P20枪头轻轻重悬表达EGFP的NPC细胞，并将2微升细胞悬液转移至预冷的无菌玻璃载片上。从冰上取出预先装好的胰岛素注射器，针尖斜面朝下，缓慢吸取2微升细胞悬液。在将显微镜对准培养皿之前，先打开含有类器官的培养皿盖子。
用一只手握住培养皿，将针头斜面朝上。另一只手缓慢将细胞注入类器官表面。注射完成后，盖上培养皿盖，将注射后的类器官孵育一至两分钟。
然后，轻轻向孔板中加入 500 µL 类器官培养基，再用宽口枪头将类器官转移至 24 孔板中。将类器官置于 37 °C、5% 二氧化碳条件下培养，每隔两天完全更换一次培养基。