将荧光标记的神经前体细胞注射至人脑类器官以建立移植模型

0 次观看3:40 分钟 • August 29th, 2025

从荧光标记的诱导多能干细胞来源的神经前体细胞(NPCs)开始。

将细胞重悬于细胞外基质水凝胶中,以制备均匀的细胞-基质混合物。

将混合物置于冰上孵育。

接下来,将一个人类脑类器官转移至培养皿中。

去除多余的培养基,将培养皿置于显微镜下进行注射操作。

将细胞-基质混合物滴加到预冷的无菌玻片上,并使用预冷的注射器吸除。

缓慢将混合物注入类器官表面,以尽量减少对组织的损伤。

让类器官短暂静置,然后加入培养基,将类器官转移至多孔板中,并进行培养。

水凝胶固化,将神经前体细胞固定在注射部位。使用荧光显微镜追踪神经前体细胞。

随着时间的推移,神经前体细胞增殖并迁移至类器官的远端区域,在这些区域分化为未成熟和成熟的神经元。

这能够实现可靠的细胞移植,同时将类器官的损伤降至最低,适用于神经细胞治疗。

首先将诱导多能干细胞或iPSC来源的神经前体细胞(NPCs)的单细胞悬液从冰上取出,在4摄氏度下以300g离心5分钟。

弃去上清液,将细胞沉淀重悬于3毫克/毫升的溶解型基底膜基质中,以获得每注射2微升的终体积。立即将悬液放回冰上,直至使用。将预冷的注射器从20摄氏度冰箱转移至冰桶中,以备后续使用。

接下来,将脑类器官培养板从培养箱中取出,使用宽口吸头将类器官转移至35毫米培养皿中。为稳定类器官并便于注射,尽可能吸除培养基,注意避免损伤类器官。将含有类器官的35毫米培养皿置于体视显微镜下,以利于进行注射操作。

当类器官准备注射时,使用预冷的P20枪头轻轻重悬表达EGFP的NPC细胞,并将2微升细胞悬液转移至预冷的无菌玻璃载片上。从冰上取出预先装好的胰岛素注射器,针尖斜面朝下,缓慢吸取2微升细胞悬液。在将显微镜对准培养皿之前,先打开含有类器官的培养皿盖子。

用一只手握住培养皿,将针头斜面朝上。另一只手缓慢将细胞注入类器官表面。注射完成后,盖上培养皿盖,将注射后的类器官孵育一至两分钟。

然后,轻轻向孔板中加入 500 µL 类器官培养基,再用宽口枪头将类器官转移至 24 孔板中。将类器官置于 37 °C、5% 二氧化碳条件下培养,每隔两天完全更换一次培养基。

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最后更新:29 八月 2026