基于光降解水凝胶的微孔阵列细菌菌落分离

从一个在其平坦表面涂覆有惰性层的微孔阵列开始。

将细菌细胞悬液加入阵列中，使其沉降至微孔内。

剥离涂层以去除表面附着的细胞，保留定位于孔内的细胞。

然后，将微孔阵列固定在间隔片之间。

取一个带有非粘附涂层的载玻片，并在其上滴加含有溶解于缓冲液中的合成聚合物和交联剂的水凝胶前体溶液。

将玻片倒置在阵列上并进行孵育。交联剂与聚合物反应形成多孔水凝胶，从而包埋细胞。

取出载玻片，并将芯片放入支持细菌生长且含有抗生素以防止污染的培养基中。

受限的细菌增殖形成空间上分离的菌落。

该水凝胶含有光降解交联键，在紫外光照射下会断裂，从而实现水凝胶的靶向降解，以选择性提取细菌菌落。

将光密度（OD 600）为 0.1 的细菌细胞悬浮液 700 微升接种至微孔阵列基底上，并按照先前所述方法，使用 12.5 微升 pH 为 8 的磷酸盐缓冲液 ATGN 配制水凝胶前体溶液。用移液器吸取 12.5 微升前体溶液滴加至一块非反应性全氟烷基化玻璃载片上，在已接种细胞的微孔阵列基底相对两侧放置两个 38 微米厚的钢制间隔片。然后将带有前体溶液液滴的全氟烷基化玻璃载片翻转，使液滴对准并置于微孔基底中央。

室温孵育25分钟后，水凝胶形成，此时轻轻将玻璃盖玻片从微孔基底上取下，并将基底置于含有添加了抗生素的ATGN培养基的培养皿中。