检测经外膜囊泡预处理的巨噬细胞中 Legionella pneumophila 的复制

从一个含有经细菌 Legionella pneumophila 外膜囊泡（OMVs）处理过的巨噬细胞的多孔板开始。

以特定的细菌-宿主细胞比例加入 Legionella pneumophila，感染经 OMV 处理的巨噬细胞。

孵育期间，巨噬细胞将细菌摄入由膜包被的吞噬体中。

OMV 预处理改变巨噬细胞信号通路，抑制吞噬体成熟。

这有助于形成一个 军团菌含细菌的液泡，可保护细菌并使其在细胞内复制。

加入去污剂并孵育以裂解巨噬细胞。这会将细胞内的细菌释放到培养基中。

将稀释后的裂解液划线接种到营养增强型琼脂平板上。

孵育期间，细菌生长并形成可见的菌落。

计数菌落以确定菌落形成单位（CFU），该数值代表可存活细菌的数量。

比较经OMV处理与未处理的巨噬细胞的菌落形成单位（CFU）计数。

与未处理的巨噬细胞相比，经OMV处理的巨噬细胞中更高的CFU表明OMV有助于 军团菌 巨噬细胞内存活

在不更换细胞培养基的情况下，用野生型L. pneumophila核心B株感染经预处理或未预处理的THP-1细胞，或用该菌株的鞭毛缺失突变体感染小鼠BMDM细胞。

以感染复数（MOI）0.5加入细菌，相当于每孔 1 × 10⁵ 个 L. pneumophila。将培养物分别孵育 24 和 48 小时。为裂解细胞，加入皂苷至终浓度为 0.1%，并孵育细胞 5 分钟。

然后取50 µL所需稀释液划线接种于BCYE琼脂平板上，将平板培养三天。

用肉眼直接计数形成的菌落，并根据文本方案进行计算。