0 次观看 • 3:12 分钟 • August 29th, 2025
取一培养物，其中含有具有厚肽聚糖细胞壁的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。
将菌液接种于含有抗生素的新鲜培养基中，并在适宜温度下振荡培养，以促进细菌生长。
将培养物转移至离心管中，离心以沉淀细菌。
弃去上清液，并将沉淀置于冰上，以保护细菌免受损伤。
将沉淀重悬于裂解缓冲液中，并转移至含有二氧化硅珠的离心管中。
将试管放入机械细胞裂解仪中并启动振荡。
细菌与珠子之间的快速碰撞产生剪切力，从而裂解细菌，释放出DNA、RNA以及RNA-蛋白质复合物。
裂解缓冲液中的离子可稳定RNA结构，而缓冲液中的还原剂则可使降解RNA的酶失活。
现在，再次离心混合物以沉淀残渣。
收集含有核酸和蛋白质的上清液，用于后续分析。
将含有 pCN51 P3 MS2 sRNA 或 pCN51 P3 MS2 质粒的菌株分别接种于三毫升 BHI 培养基中，每份培养基中添加 10 µg/µL 红霉素，每组设两个重复。
将每种过夜培养物用50毫升新鲜的添加红霉素的BHI培养基稀释，使OD600达到0.05。在37°C、180 RPM振荡条件下培养6小时。将每种培养物转移至50毫升离心管中，在4°C、2,900 ×g条件下离心15分钟，弃去上清液，将沉淀物在-80°C冷冻保存，或置于冰上直接进行机械细胞裂解。
为进行机械细胞裂解，将沉淀重悬于5毫升缓冲液A中，并将重悬的细胞转移至含有3.5克玻璃珠的15毫升离心管中。将离心管放入机械细胞裂解仪中，以每秒4米的速度运行一个40秒的循环。然后在2,900 × g下离心15分钟，收集上清液并置于冰上保存。
确保上清液澄清，若不澄清则需重复离心。