体内检测细菌生物发光与细胞密度的相关性

取已转化含有可诱导基因质粒的细菌菌落。

挑取单个菌落接种于新鲜液体培养基中。

在振荡条件下孵育，以促进氧气交换和细菌均匀生长。

使用稀释后的培养样品测定吸光度并估算细胞密度。

使用黑色器壁、玻璃底的孔板，以防止样品间的光串扰，确保荧光素酶活性定量的准确性。

将具有所需细胞浓度的细菌培养液加入到孔板的孔中。

加入抗生素以维持质粒保留。

加入诱导剂以启动基因表达。

该基因编码一种酶，可与特定的细菌蛋白反应并产生光，从而使细菌具有生物发光特性。

将平板盖上盖子以防止蒸发，然后放入具有恒定振荡模式的温控酶标仪中。

定期记录吸光度以测定细胞数量，并记录光强度以监测生物发光。将细胞密度与生物发光强度进行关联分析。

从过夜培养的平板上挑取单菌落，接种于3毫升培养基中，在28°C、180 rpm条件下振荡培养约1至2小时。

在650纳米处测定液体培养物1:10稀释液的细胞密度。然后计算OD650为0.05的1毫升培养液所需的培养物体积比例和体积。用移液器将计算出的培养物体积和培养基加入到带有玻璃底的24孔黑色孔板中。

为确保含有完整lux操纵子的pET28a载体不会丢失，并在改造后的E.coli菌株中得到表达，需向样品中加入一微升卡那霉素和一微升IPTG。然后盖上培养板盖，以避免测量过程中发生蒸发。最后，使用设定为28摄氏度的酶标仪，并加载文本方案中提供的脚本，每隔10分钟进行一次吸光度和生物发光检测，两次数据采集之间进行振荡。