0 次观看 • 2:58 分钟 • August 29th, 2025
取一个含有经荧光标记内体的人类上皮细胞的腔室载玻片。
引入细胞内致病菌并进行孵育，使其与细胞黏附。
细菌注入蛋白质，这些蛋白质会重组宿主细胞骨架，形成膜突起，将细菌内化至囊泡中。
这些液泡延伸出管状突起，与内体-溶酶体系统相连，后者是由调控细胞内物质运输的囊泡和细胞器组成的网络。
这些突起会重定向囊泡运输并重塑内体-溶酶体系统。
洗涤以去除细胞外细菌，然后在含抗生素的培养基中孵育，以清除任何残留的细菌。
更换为含有抗生素的无血清成像培养基，并加入带有对比荧光染料标记的纳米颗粒。
孵育以使纳米颗粒通过内吞作用进入并在重塑的囊泡中积累。
洗涤以去除未内化的纳米颗粒，然后在含血清的成像培养基中孵育。
荧光纳米颗粒和标记的内体能够实现对细菌诱导的内体-溶酶体重塑的可视化观察。
开始此实验步骤时，测定亚培养细菌的 OD 600，并用一毫升 PBS 稀释至 OD 600 为 0.2，然后将适量的细菌加入 8 孔板中的 HeLa 细胞，使感染复数达到 100。在细胞培养箱中孵育 30 分钟。
用 PBS 清洗 HeLa 细胞三次，以去除未被内化的细菌。此时间点定义为感染后零小时（即零小时 p.i.）。向细胞中加入 300 微升含有 100 微克/毫升庆大霉素的新鲜培养基，继续培养 1 小时。
孵育一小时后，将培养基更换为含有 10 微克/毫升庆大霉素的成像培养基。向 HeLa 细胞中加入金-BSA-罗丹明纳米颗粒，使其终浓度达到 OD520 为 0.1。
孵育1小时。1小时后，移除培养基，并用PBS洗涤3次。最后，加入300 µL新鲜成像培养基，其中含有10% FCS和10 µg/mL的庆大霉素，用于后续孵育阶段。