通过免疫突触形成的体外细菌转感染T细胞

从含有表达对卵清蛋白肽或OVAp特异性受体的CD4⁺ T细胞的孔开始。

在阴性对照孔中，放入多孔膜小室。

在离心管中，取已感染细菌并负载OVAp用于表面呈递的树突状细胞。

将树突状细胞直接加入检测孔以及阴性对照孔的插入物中。

向孔中加入培养基并孵育。

在检测孔中，细胞相互作用形成免疫突触，促进细菌从树突状细胞转移至T细胞，该过程称为跨感染。

在阴性对照孔中，膜屏障阻止了细胞间的相互作用，从而抑制了转感染。

向孔中加入抗生素庆大霉素并孵育。

庆大霉素无法穿透真核细胞，因此只能杀死未被内化的细菌，而被内化的细菌则存活下来。

含有感染性T细胞的检测样本和含有未感染T细胞的对照样本现已准备就绪，可用于T细胞分离和转感染定量。

向24孔培养板中的五个孔，每孔加入两百万个CD4⁺ T细胞，体积为0.5毫升。

接下来，为了排除物理接触的影响，将孔径为3微米的聚碳酸酯跨孔屏障放入第三和第四孔中。向第一孔加入0.1毫升感染且过载的树突状细胞，向第二孔加入0.1毫升感染但未负载的树突状细胞。

将0.1毫升感染的超载树突状细胞加入一个孔中，将0.1毫升感染的非负载树突状细胞加入另一个孔中。最后，作为阴性对照，以MOI为10直接感染第五孔的CD4⁺ T细胞。然后用RPMI将孔中总体积补至0.6毫升。

将培养板孵育30分钟，以使免疫突触形成。孵育结束后，向每孔中加入100 µg/mL的庆大霉素，继续孵育1小时。庆大霉素是一种氨基糖苷类抗生素，不能穿透真核细胞。

因此，在此步骤中，氨基糖苷类抗生素将杀死细胞外细菌，但不会杀死细胞内细菌。