斑马鱼胚胎中生物材料相关细菌感染的荧光成像

从注射了荧光标记的致病菌的麻醉斑马鱼胚胎开始，致病菌可单独注射，也可与生物材料微球混合注射，以在体内模拟生物材料相关感染。

将含有麻醉剂的培养基的培养皿置于配备适当滤光片的体视荧光显微镜载物台上。

加入甲基纤维素溶液至培养皿中，以形成黏稠的介质，固定胚胎以便成像。

将单个胚胎转移至甲基纤维素中，并使其水平排列，确保注射位点可见。

使用明场滤光片，聚焦于注射位点以定位感染区域。

设置Z轴成像参数，并在不同深度采集荧光图像，以三维形式捕捉感染动态。

使用软件分析随时间采集的图像，以定量荧光强度并监测细菌分布情况。

本方案可实现对暴露于生物材料与未暴露于生物材料的活体胚胎中感染进展的直接比较。

将含有E3培养基并添加0.02%三卡因的100毫米培养皿置于体视荧光显微镜载物台上，并向培养皿中加入500微升2%甲基纤维素。为通过荧光显微镜监测感染进程，需配备适当的明场和荧光滤光片，将麻醉后的感染胚胎在培养皿中的甲基纤维素滴内水平排列整齐。

使用明场滤镜在160倍放大倍数下将受损的注射组织调至焦点。将Z轴层扫深度设置为10微米，步长设置为5微米，以获取三幅连续图像。随后在相同的优化条件下，以160倍放大倍数对各个胚胎进行成像。

使用 ImageJ 中的 ObjectJ 插件来分析图像。