0 次观看 • 3:12 分钟 • September 26th, 2025
从一个含有琼脂糖小室的培养皿开始，该小室内模制有沟槽。
每个凹槽中放置经麻醉剂处理的斑马鱼胚胎，胚胎浸没于添加了麻醉剂的胚胎培养液中。
在光学显微镜下，将显微注射针插入肌肉组织中。
注射含有S. aureus和聚苯乙烯微球的悬浮液，以模拟植入物相关感染。
将注射后的胚胎转移至含新鲜培养基的多孔板的各个孔中，并进行培养。
微球提供了一个支持细菌定植并促进感染的物理表面。
为了评估植入物相关的细菌感染，将每个胚胎转移至单独的离心管中，并用缓冲液洗涤。加入缓冲液和陶瓷珠。
匀浆以裂解胚胎并释放其内含物，包括细菌。
将稀释后的匀浆液接种到平板上，然后孵育以使菌落形成。
注射了微球-细菌悬液的胚胎比仅注射细菌悬液的胚胎具有更高的菌落计数，这表明微球增加了胚胎的感染易感性。
等待胚胎麻醉五分钟后，将胚胎沿凹槽按单一方向排列，以便进行注射。将显微注射仪设置为适当的注射参数，在体视显微镜下以45至60度的角度将注射针插入第一个胚胎的肌肉组织中。
根据需要轻轻前后移动针头，以调整其在组织内的位置，并使用显微注射仪脚踏板注入已加载的悬浮液。当将细菌微球悬浮液注射到斑马鱼胚胎组织中时，应以稳定的手法轻柔插入针头。成功插入后，应在注射前为材料留出一定的空间。
将胚胎维持在不含三卡因的E3培养基中，置于48孔板的单个孔内，每天更换培养基。为通过菌落形成单位定量监测感染进展，在注射后不久随机将五至六个存活的感染胚胎转移至单独的2毫升微量离心管中，并用无菌PBS轻轻洗涤胚胎。弃去洗涤液后，向每根试管中加入100微升无菌PBS，随后加入两到三颗无菌的直径为2毫米的氧化锆珠。
然后在匀浆器中以3,500 rpm的速度匀浆30秒，随后按所示方法培养匀浆液。