单细胞细菌接种物的制备

取一株代谢活跃的Mycobacterium marinum培养物。这可确保细菌具有较高的存活率和最佳的生理状态。

离心培养物以沉淀细菌。

弃去多余的上清液，将沉淀重悬于含有分散剂的新鲜培养基中。

将悬液转移至微量离心管中，并在受控条件下进行超声处理。

超声处理可破坏细菌聚集体并分散细胞，从而获得可存活的单细胞悬液。

用注射器收集超声处理后的悬浮液，通过膜滤器过滤，以去除任何残留的团块，确保获得均匀的单细胞群体。

使用分光光度计测量细菌悬液的光密度。

用含有新鲜冷冻保护剂的培养基稀释该悬浮液，以达到所需的细菌浓度，同时保持细胞活力。

分装最终的单细胞悬液，并于超低温条件下保存。冷冻保护剂有助于维持细菌在长期储存期间的活性。

根据文稿所述接种后，以3000 × g离心10分钟，将海分枝杆菌沉淀收集为菌体沉淀。弃去上清液，仅保留300 µL，并重新悬浮沉淀物。

加入3毫升含10%甘油的7H9培养基以进一步重悬沉淀，随后将悬液置于水浴中超声处理，功率100瓦，开启15秒，关闭15秒，总时长2分钟，以获得单细胞均质悬液。将细菌悬液转移至10毫升注射器中，通过5微米滤膜过滤，去除任何细菌团块。使用分光光度计测定悬液的光密度，并用含10%甘油的7H9培养基稀释至600 nm处的光密度（OD600）为1.0。

将悬液分装为每份10 µL，于-80°C冰箱中保存，以备后续使用。