0 次观看 • 2:48 分钟 • September 26th, 2025
取一个比色皿，其中含有溶解于磷酸盐缓冲液中的硫黄素T工作溶液，硫黄素T是一种特异性结合淀粉样蛋白的荧光染料。
将比色皿放入荧光分光光度计中，记录基线荧光信号。
暂停扫描并取出比色皿。
加入从感染了高毒力Pseudomonas细菌的肺内皮细胞收集的滤膜灭菌培养上清液。
上清液中含有淀粉样聚集物，这些聚集物是错误折叠且富含β-折叠结构的蛋白质。
轻轻倒置混合内容物，以确保均匀分布。
将比色皿重新放入荧光分光光度计中，并继续扫描以获取基于时间的荧光信号。
硫黄素T可特异性结合富含β-折叠的淀粉样蛋白，从而导致荧光增强。
使用相同的设置进行荧光扫描。
荧光强度相对于基线的增加表明培养上清液中存在感染诱导的淀粉样蛋白，且其相对丰度较高。
为了定量上清液中的淀粉样蛋白，将 20 微升新鲜配制并过滤的 50 倍硫黄素 T 储存液加入到 1 毫升 PBS 中，置于 1 毫升分光光度计比色皿内，然后将稀释后的样品加入荧光分光光度计中进行检测。
使用425纳米激发光测量基础荧光发射。以2纳米为步长，扫描450至575纳米范围内的荧光发射。然后将仪器设置为进行时间推移扫描，激发光为425纳米，发射光为482纳米，每0.2秒采集一次数据，持续60秒。
20 秒后暂停扫描，向比色皿中加入 10 微升经滤膜除菌的上清液。颠倒混匀后，将比色皿重新放入荧光分光光度计中，继续进行剩余 40 秒的时间依赖性扫描。时间扫描结束后，使用原始扫描设置进行最终的荧光发射光谱扫描。