利用生物发光技术追踪小鼠体内细菌感染动态

从一种减毒的致病性细菌菌株悬液开始。

由于毒力基因中存在靶向缺失，该减毒株的致病性降低。

这些细菌的染色体上带有一个生物发光操纵子标记，能够实现自主发光。

细菌表达生物发光操纵子，产生荧光素酶以及合成荧光素酶底物的酶复合物。

荧光素酶将底物氧化以产生可见光。

离心悬浮液，弃去上清液。

用缓冲液洗涤细胞，再次离心，并弃去上清液以去除残留的非细胞成分。

用缓冲液重悬细胞，以达到最佳的细菌浓度，并将悬液吸入注射器中。

将悬浮液注射到小鼠腹腔内，然后将其转移到笼子中。

定期观察生物发光信号。

减毒株保持局部化，生物发光信号逐渐减弱，表明感染被清除。

在注射当天早晨，将冻存管中的细菌细胞置于4摄氏度条件下解冻3至4小时。解冻后立即将冻存管置于冰上，并在两小时内完成小鼠注射。将每支冻存管中的内容物转移至新的2毫升离心管中，在4,500 × g条件下离心10分钟。

弃去上清液，将细胞沉淀重悬于一毫升磷酸盐缓冲液（PBS）中。再次离心后，将细胞重悬于PBS中，最终浓度为每毫升2.5 × 10⁹个菌落形成单位。从每种菌株的最终悬液中取三个样品，以验证浓度、基因型和表型。

对于每种菌株，取1.5毫升细胞悬液分装至2毫升离心管中，并准备用于对照注射的磷酸盐缓冲液（PBS）。在无菌动物手术室中准备好注射所需的小鼠及相关材料，操作开始前用消毒湿巾擦拭所有表面。佩戴两副乳胶手套以降低被咬伤后刺穿的风险，同时穿戴实验服、护目镜和口罩。

将小鼠从笼中取出并称重，用永久性记号笔标记尾巴，以便注射后追踪。打开一支新的1毫升注射器，安装27号针头，吸取200微升无菌PBS。用拇指和食指抓住小鼠耳后部位，并捏起颈部背侧皮肤形成皱褶。

然后，用小指将小鼠尾巴固定在掌心，使小鼠保持平直且静止不动。将针头以30度角插入腹腔，位置在腹中线左侧或右侧。轻轻抬起针头，以确保未刺入器官内。

然后缓慢注入 PBS 并拔出针头。注射部位出现药液团块是正常现象。将针头放入指定的锐器废弃容器中，并将小鼠转移至另一个笼子。

对下一只小鼠重复上述操作，待同一笼中的所有小鼠注射完成后，将其放回原来的笼子中。完成对照组注射后，采用相同操作对实验组小鼠进行注射。所有注射完成后，将小鼠送回饲养室，并使用消毒湿巾清洁工作区域。

将氧气流速设为1.5升/分钟，异氟烷浓度设为3.5%，将小鼠移入麻醉舱，随后转移至恒温载物台。麻醉后，将小鼠仰卧放置，双前肢伸展，并在成像过程中通过鼻罩给予2.5%异氟烷。

关闭门并采集小鼠的生物发光图像和X光片。成像完成后，将小鼠放回笼中并进行监测。小鼠应在三到五分钟内恢复意识。