从液体培养物中制备与分离委内瑞拉链霉菌孢子

从一个含有弹簧并装有富含营养的培养基的烧瓶开始，该培养基可支持委内瑞拉链霉菌（Streptomyces venezuelae）细菌完整生命周期的生长。

将细菌孢子接种到培养基中，并在振荡条件下培养，以确保充分通气和营养物质均匀分布。

弹簧可增强混合效果，支持均匀且稳定的生长。

孢子吸收营养并萌发，产生在顶端延伸的芽管，进而分支形成菌丝，并发育成菌丝体结构。

当营养物质变得有限时，该生物体会产生特殊的孢子丝，其分裂并形成孢子，即处于休眠状态的生殖细胞。

在相差显微镜下观察，以确认菌丝片段和孢子的存在。

离心培养物以沉淀较重的菌丝碎片，使较轻的孢子留在上清液中。

将上清液转移至微量离心管中，并置于冰上以防止过早萌发。

将孢子悬液用新鲜培养基稀释，并在低温条件下保存，以备后续使用。

将10 µL待成像的S.venezuela菌株孢子接种至30 mL补充完全的生长培养基中。为确保细胞生长和产孢的一致性，应使用带挡板的锥形瓶或内置弹簧的锥形瓶，以保证充分通气。

在30摄氏度、250转/分钟条件下培养细胞35至40小时。培养完成后，可通过液体封片相差显微镜观察到菌丝片段和孢子。取1毫升培养物，在台式离心机中以400 × g离心1分钟，使菌丝体和较大的细胞碎片沉淀。

然后将含有孢子悬浮液的上清液约 300 微升转移至新的 1.5 毫米离心管中，并将离心管置于冰上。