利用光图案化水凝胶降解实现靶向细菌菌落分离

0 次观看3:07 分钟 • September 26th, 2025

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取一个载玻片,其上带有包含被包埋细菌菌落的光降解性水凝胶层,这些细菌经过基因改造可发出荧光。

将盖玻片放入持片架中。

添加培养基以防止样本脱水。

在明场显微镜下,聚焦于一个感兴趣的单菌落。

使用适当的软件,在菌落边缘设计光照图案以降解水凝胶的结构键,同时尽量减少细胞的紫外线暴露。

调整紫外光强度和曝光时间。

启动紫外光照射,以断裂水凝胶暴露区域的结构键,促进目标菌落的释放。

使用荧光滤光片识别菌落。

将管子的一端置于该位置,另一端连接至注射器。

切换至明场模式,并使用注射器吸出已释放的菌落。

将菌落转移至离心管中以进行后续分析。

将样品置于PDMS持载器中,并在样品上方加入指定的培养基,以防止样品脱水,并为释放的细胞提供载体溶液。将校准镜片调整至指定位置后,调节显微镜焦距,以获得水凝胶或微孔阵列内菌落的清晰图像,并进行观察,识别感兴趣的菌落或微孔。

在此处设计光斑图案,同时通过相机视图观察样品内的菌落,以测试不同图案的细胞提取效果,并保存设定的图案。然后选择会话控制部分,在以图案化照明工具产品名称命名的标签页下添加已保存的序列。选择激发该图案的选项,以查看并调整所需的曝光位置。

接下来,在LED控制选项卡下将光照强度调整为60%,曝光时间调整为40秒,并启动曝光过程。通过实时明场模式监测水凝胶的降解情况,以确保细胞被释放。为收集释放的细胞,将显微镜滤光片从明场切换至TRITC,以便肉眼观察样品的曝光区域。

确定暴露区域后,将管子的末端置于照射部位,然后将显微镜滤光片切换回明场,以实时监测细胞的回收。使用连接在管子另一端的注射器小心吸取含有释放细胞的200 µL溶液,并将该溶液转移至1.5 mL离心管中,用于DNA分析或接种培养。

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最后更新:1 八月 2026