0 次观看 • 2:37 分钟 • September 26th, 2025
从两种细菌菌株开始，一种为参考菌株，另一种为竞争菌株，每种菌株分别表达一种独特的荧光标记，用于菌株鉴定。
将菌株按等比例混合，并将混合液点样到琼脂平板上。
孵育平板，使菌株生长并相互作用。
竞争者通过依赖接触或不依赖接触的机制，战胜了参照菌株。
在接触依赖性竞争中，竞争菌利用特化的分泌系统将毒素直接递送至参考菌株内。
在非接触依赖性竞争中，竞争菌会释放毒素，这些毒素扩散到周围培养基中并进入参照菌株。
这些毒素会干扰参照菌株中的关键生命过程，包括细胞壁合成、DNA复制和蛋白质合成，导致生长停滞、细胞死亡以及荧光表达降低。
孵育后，在荧光显微镜下观察培养板。
与荧光更强的竞争对手相比，参照菌株的荧光减弱表明存在竞争性相互作用。
为将参考菌株与竞争菌株按1:1比例混合，取各100微升已调整至OD 1.0的菌液，加入已标记的1.5毫升离心管中，涡旋混匀1至2秒。作为对照，将参考菌株与其带有不同标记的版本混合，同样进行涡旋处理。
获得正确的起始比例至关重要，因为该比例会显著影响实验结果。为确保成功，此步骤可能需要针对特定细菌种类进行优化。在对每个生物学重复样本重复此步骤后，应包含四个带有不同标签标记的参照菌株作为对照的生物学重复样本，以及四个同时带有不同标签标记的参照菌株和竞争菌株的生物学重复样本。
为了在孵育后用于荧光显微镜观察，将每种对照和实验混合物各10微升滴加到含有LBS琼脂的培养皿上。待液滴在台面上完全干燥后，于24摄氏度孵育培养皿24小时。