乳酸菌的复苏与生长

从乳酸菌的甘油冻存菌种开始，该菌为一种在无氧条件下生长的厌氧微生物。

冷冻使细菌暴露于冷诱导的应激环境中，从而降低其细胞功能。

涡旋混匀试管以重悬细胞，并将一部分转移至营养肉汤中。在厌氧条件下培养。

在此环境中，细菌通过厌氧代谢产生能量，从而支持其恢复并重建细胞活性。

将培养物转移至新鲜肉汤中，以提供新的营养物质，促进细胞快速分裂。

处于活跃生长状态的细胞会使培养基酸化，表明其已恢复并正在生长。

将菌种划线接种至琼脂平板上，在厌氧条件下培养以促进细菌生长。

代谢活跃的细胞可形成可见的菌落，而受损或失活的细胞则无法生长。

将分离的菌落转移至新鲜肉汤培养基中，涡旋混匀，然后进行厌氧培养，以获得纯度高、性能良好的菌种。

该方法可恢复有活力的细胞用于后续应用。

从-80摄氏度超低温冰箱中取出含有乳酸菌（LAB菌株）的预置甘油菌种，置于2毫升离心管中。

使用前请勿使其解冻。用70%酒精清洁并消毒离心管管口，轻轻涡旋混匀后再使用。从离心管中移取约250 µL的储备LAB菌液至新的2 mL MRS试管中。

轻轻涡旋试管，用封口膜封口，然后在42摄氏度下厌氧培养过夜，培养时间为12至16小时。接着，从2毫升MRS试管中过夜培养的菌液中取出约500微升，转接到新的7毫升MRS试管中，涡旋混匀后，在42摄氏度下厌氧培养过夜，培养时间为12至16小时。使用紫外-可见分光光度计在610纳米处测定菌液的光密度（OD）以评估微生物生长情况，并记录0.7至0.9之间的合格结果。

将7毫升MRS试管中的过夜培养物划线接种至MRS和MRCMPYR琼脂平板上，于42摄氏度厌氧条件下培养72小时。从琼脂平板上挑取分离的菌落，转移至新鲜的7毫升MRS试管中，轻轻涡旋混匀，并于42摄氏度厌氧条件下过夜培养12至16小时。将含有分离菌株的琼脂平板置于4摄氏度冰箱中保存一周。

接下来，测量并确认从划线平板分离的乳酸菌（LAB）培养物在7毫升MRS试管中于610纳米处的光密度，并将其用作所有相关实验的工作培养物。