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微生物学
0 次观看 • 2:45 分钟 • September 26th, 2025
采用带有生长室和药物室的微流控芯片，两室之间由微机械阀隔开。
使用压力将悬浮于培养基中的野生型和耐甲氧苄啶（TMP）突变型E. coli菌株注入生长室，其中甲氧苄啶（TMP）为所测试的抗生素。
接下来，将含有低浓度TMP的培养基加入药物室，以在细菌中诱导细胞应激。
启动微机械阀门，使 TMP 扩散进入培养室，从而促进 TMP 进入细菌内部。
将芯片置于倒置显微镜载物台上的培养箱内，并启动延时成像。
在野生型 E. coli 中，TMP 会结合二氢叶酸还原酶，阻止二氢叶酸的结合，从而引起应激诱导的丝状化并抑制细菌增殖。
然而，突变菌株的二氢叶酸还原酶（DHFR）结构发生改变，阻碍了甲氧苄啶（TMP）的结合，从而使其能够正常增殖。
观察延时图像。
在甲氧苄啶（TMP）处理下，野生型 E. coli 出现丝状化且增殖减少，而突变菌株则表现出正常形态与增殖，表明其具有抗生素抗性。
在室温下解冻每日的冷冻样本五分钟之后，用新鲜的M9培养基接种一个新的试管。
将样品置于37摄氏度的摇床培养箱中过夜。次日，用M9培养基将微生物样品稀释十倍，并通过在五PSI压力下加压微生物样品容器，将其加载到微流控装置中。然后，在五PSI压力下加压含TMP的M9培养基容器，将含TMP的培养基加载到芯片中。
通过启动微流控芯片上两个腔室之间的微机械阀，使微生物与药物混合反应15分钟。最后将微流控芯片置于倒置显微镜上的显微镜培养箱中。使用CCD相机，每小时在生长腔内采集一次细胞图像，持续八小时。
根据文本方案计算细胞数量数据。