通过微阵列筛选高通量鉴定抗细菌聚合物

0 次观看2:49 分钟 • September 26th, 2025

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将一块经过灭菌且涂有琼脂糖的微阵列芯片(芯片上含有多个聚合物点)放入多孔板中。琼脂糖可最大限度减少细菌的非特异性结合。

将混合细菌培养物加入载玻片,并在轻柔振荡条件下孵育。

细菌会分泌特定的黏附蛋白,这些蛋白可结合到有利的聚合物位点上,从而随时间推移增强细菌的附着和定植。

相反,防污聚合物能够抵抗蛋白质吸附,并减少细菌附着。

用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗载玻片,以去除松散结合的细菌。

加入 DAPI 以染色贴附在表面的细菌的 DNA。

用 PBS 清洗载玻片,干燥后用粘性盖玻片封片。

用乙醇对载玻片外表面进行灭菌。

拍摄明场图像以定位聚合物斑点,然后切换至荧光模式以检测聚合物斑点上的荧光。

荧光较弱的聚合物斑点表明细菌附着较少,被鉴定为抗细菌黏附的聚合物。

根据文本方案,在培养并制备好微阵列所需的接种物后,将经紫外线灭菌的聚合物微阵列放入矩形四孔板中,并加入六毫升混合细菌培养物。将板在37摄氏度下轻柔振荡培养五天。培养结束后,用PBS轻轻冲洗微阵列两次。

然后在 PBS 中加入终浓度为每毫升 1 微克的 DAPI,孵育 30 分钟。接着将微阵列转移至新的四孔板中,用 PBS 覆盖微阵列后轻轻振荡。随后更换一次 PBS,并重复洗涤步骤。

洗涤后,在气流下将微阵列干燥,然后贴上封片膜,并将玻璃盖玻片固定到微阵列载玻片上。待胶水干燥后,使用70%乙醇对外表面进行消毒。使用配备20倍物镜的荧光显微镜,在明场和DAPI通道中分别采集每个聚合物点的单张图像。

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最后更新:15 八月 2026