0 次观看 • 3:28 分钟 • September 26th, 2025
取一个含有无菌培养基且 pH 值呈酸性的容器。
将带有植物幼苗的网筛转移到容器中。
用盖子和多孔胶带密封，以保持无菌状态，同时允许气体交换。
振荡培养以通气。
观察培养基，检查是否无浑浊现象，以确认无细菌污染。
将样品点样到培养平板上，孵育后观察细菌生长情况，若无细菌生长，则证实无污染细菌存在。
用农杆菌（Agrobacterium，一种植物病原菌）接种，并进行培养。
植物根部分泌的信号分子和酸性pH值可激活一种细菌膜结合的传感器蛋白。
这种激活会诱导基因表达，产生用于细菌附着于根部表面的蛋白质。
附着后 农杆菌 通过分泌系统将一段称为转移DNA（T-DNA）的DNA片段递送至植物细胞中。
T-DNA 整合到植物基因组后，会合成信号分子，从而增强细菌的定植。
在无菌操作台中，将18毫升经高压灭菌的液体MS培养基倒入带有无菌盖子的无菌圆柱形玻璃容器中。
接下来，使用无菌镊子将每个带有10至14天幼苗的网格方块从半固体培养基的培养皿中轻轻转移至水培圆柱形罐中。此处所示幼苗为苜蓿。使用多孔外科胶带将罐盖密封。
然后，在22至24摄氏度条件下，以16小时光照周期、50 rpm振荡培养幼苗。接种前，仔细检查幼苗培养罐是否存在任何潜在污染。未受污染的培养罐中的培养基应保持清澈透明。
若培养罐因污染而浑浊，则将其丢弃，并对剩余的培养罐进行编号。从每个编号的培养罐中取 20 微升水培培养基，滴加到含有LB肉汤或LB琼脂的培养皿上。将培养皿在 28 °C 下孵育 28 小时。
立即将每50微升的Agrobacterium tumefaciens菌液接种到每个编号的水培罐中。将幼苗与A. tumefaciens细菌在22至24摄氏度、16小时光照周期及50 rpm振荡条件下共培养。在培养12小时和28小时后检查LB平板上的菌落，以确认水培培养基的无菌状态。
如果存在任何污染，请勿将相应编号的接种了细菌的培养罐用于后续的下游实验。