用于病毒颗粒生产的 Borrelia burgdorferi 培养物的制备与诱导

从一种遗传修饰的伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi）菌株培养开始，该菌株为一种致病性细菌。

该菌株携带已整合到其基因组中的休眠噬菌体DNA，该DNA经过基因工程改造，包含一个赋予抗生素抗性的目标基因。

加入相应的抗生素并培养菌液。抗生素抗性基因表达一种能够抑制该抗生素的蛋白质，从而确保只有携带该基因的细菌才能增殖。

当培养物达到所需密度后，离心细胞以形成沉淀，并弃去上清液。

重悬沉淀，加入化学诱导剂，并孵育以诱导DNA损伤。

由此产生的DNA修复反应会切除噬菌体DNA，启动其复制、结构蛋白的表达以及携带抗生素抗性基因的新的病毒颗粒的组装。

再次离心培养物，弃去上清液，并将细胞重悬于新鲜培养基中。

含有成熟病毒颗粒的细菌细胞已准备好进行后续的下游应用。

将适量的Borrelia burgdorferi克隆菌液150微升接种至15毫升BSK培养基中，使用带紧密盖子的无菌锥形离心管进行转导实验。随后，在培养基中添加适当浓度的抗生素或多种抗生素组合，用于在Borrelia burgdorferi克隆中筛选并维持外源DNA，并将样品在33摄氏度条件下培养。待培养物生长至适当浓度后，取适量培养液在6,000 G条件下离心10分钟。

倒出上清液后，将沉淀重悬于4 mL新鲜BSK培养基中，并将样品转移至可容纳样品且顶部空间最小的最小无菌管中。随后，根据4 mL培养体积，加入适量诱导剂至推荐浓度，以诱导噬菌体产生，盖紧管盖并充分混匀。将样品在33°C下孵育2至4小时。

然后，将样品转移至15毫升离心管中。以6,000 G离心10分钟。弃去上清液后，用15毫升BSK重悬细胞沉淀。