从琼脂培养物中传代培养亚硫酸盐还原厌氧菌

从一块已预先接种食品样本并长有细菌菌落的鉴别性琼脂平板开始。

好氧细菌在表面生长，而厌氧细菌则在琼脂更深层发育，其中亚硫酸盐还原细菌将亚硫酸盐还原为硫化氢。

随后，硫化氢与培养基中的柠檬酸铁铵反应，形成黑色沉淀。

观察琼脂平板深层是否有黑色斑点，以指示亚硫酸盐还原菌的存在。

传代培养这些细菌时，使用无菌细胞刮刀轻轻去除不需要的好氧细菌层，从而创建一个干净的接种入口。

将无菌滴管插入培养基中时，避免引入空气，以维持厌氧条件。

小心提取嵌入的黑色菌落。

将菌落转移至含有新鲜培养基的无菌试管中。

最后，将试管 tightly 封口，并在厌氧条件下孵育，以促进亚硫酸盐还原细菌的进一步生长。

孵育结束后，检查平板上的细菌生长情况。

琼脂表面可能存在需氧细菌，而厌氧细菌则会嵌入琼脂内部。亚硫酸盐还原细菌会使周围琼脂变黑，可能的 C. perfringens 菌落呈黑色并嵌于琼脂中。如果平板表面有大量需氧细菌生长，可使用细胞刮刀去除所选区域的菌落。

使用无菌一次性滴管从琼脂平板上挑取疑似产气荚膜梭菌（C perfringens）的菌落，注意在刺入琼脂前先排出滴管内的空气。将菌落转移至含有10毫升新鲜RPM培养基的15毫升锥形管中。可从同一平板上挑取多个菌落，分别接种于不同的RPM培养基中。

将锥形管盖紧密固定，用石蜡膜包裹，并在 37 摄氏度下过夜孵育。