基于薄层色谱法分离从应激诱导的细菌中分离的 （p）ppGpp 核苷酸

从应激诱导前后从细菌培养物中获得的放射性标记核苷酸提取物开始。

在胁迫下，细菌酶将三磷酸鸟苷和二磷酸鸟苷转化为胁迫诱导的核苷酸五磷酸鸟苷和四磷酸鸟苷。

将提取物点在预涂有阳离子聚合物作为固定相的薄层色谱板上。

将板放入含有缓冲液作为流动相的腔室中，确保液体保持在点以下以防止过早扩散。

让缓冲液通过毛细管作用上升，根据其电荷和大小将带负电荷的核苷酸分离成不同的条带。

显影后，取出板，风干，修剪顶部以消除游离同位素并减少背景信号。

将板暴露在辐射敏感筛网中以检测放射性信号。

应激诱导后四磷酸鸟苷和五磷酸鸟苷水平升高揭示了鸟苷核苷酸池中的动态变化。

首先，放置一个 20 x 20 厘米的 PEI 纤维素 TLC 板。

用剪刀去掉顶部五厘米，用软铅笔在距离边缘一厘米处标记原点线。将每个样品的 5 微升液滴涂抹在 PEI 表面上。

在斑点干燥之前，将板转移到含有一层 1.5 摩尔磷酸一钾的罐中，该层足够浅，不会接触原点样品。用气密密封盖住水箱，让液体上升到 15 厘米修剪板的顶部。之后，取出完全显影的色谱图并在室温下风干。

将含有游离 P32 的色谱图的顶部切割并丢弃到放射性废物中。使用荧光粉屏幕将音频放射胶片曝光过夜。第二天，冲洗胶片并使用荧光粉成像仪捕获和定量荧光粉的绿色信号。

然后，使用 ImageJ 软件对放射性斑点进行定量。