巨囊泡内细菌的单细胞培养

从一个带有支持性膜的多室玻片开始，该膜由包括生物素化磷脂在内的磷脂组成。

加入中性亲和素孵育，使其与双层膜上的生物素结合。洗涤以去除未结合的中性亲和素。

引入含有巨大囊泡（GV）的培养基。每个GV是一种球形的、微米级的脂质双分子层囊泡，包裹着单个细菌细胞，可作为研究单个细胞在受限环境中行为的模型。

Neutravidin 与生物素化的 GV 脂质结合，将囊泡固定在支撑膜上，从而在静态条件下实现稳定、长期的观察。

密封培养室以保持湿度并尽量减少污染。

将载玻片置于配备加热平台的显微镜载物台上，以模拟生理条件，并在显微镜下观察。

培养基中的营养物质扩散进入GV，以支持细菌随时间生长。

该装置可实现对限制性囊泡微环境中单细胞细菌生长的实时可视化观察。

为了将巨型囊泡固定在支撑双层膜上，向孔中加入10微升外水相巨型囊泡溶液中的亲和素，室温孵育15分钟。

孵育结束后，用 20 微升添加了 200 毫摩尔葡萄糖的 LB 培养基轻柔地洗涤反应孔两次，并将全部体积的巨囊泡溶液加入到腔室的孔中。然后用一块 18 × 18 毫米的盖玻片密封该孔。为了监测巨囊泡内细菌的生长情况，请在倒置显微镜上选择 40X 物镜，并将腔室置于显微镜加热载物台系统上。

然后将含有细菌细胞的巨型囊泡在37摄氏度下于腔室中静置孵育6小时，每隔30分钟使用科学级互补金属氧化物半导体相机捕获并记录细菌细胞生长的图像。