0 次观看 • 4:20 分钟 • September 26th, 2025
从一个含有已接种产纤维素细菌的生长培养基的多孔板开始。
在处理孔中，培养基添加了2-氯乙基膦酸（CEPA）。
密封培养板以防止气体交换，并进行孵育。
孵育过程中，CEPA 发生水解并释放乙烯，一种气态分子。
乙烯激活细菌纤维素合酶，该酶利用胞质中的UDP-葡萄糖合成纤维素。
随着时间的推移，细菌通过其细胞膜挤出纤维素。
这会促进细菌在气液界面自组装，形成漂浮的纤维素基生物膜，即菌膜。
孵育结束后，将菌膜转移至新的多孔板中。加入碱性溶液，并在较高温度下孵育以裂解细胞。
去除碱性溶液。反复振荡洗涤以去除细胞碎片，同时保留纤维素。
干燥并称量菌膜。与对照组相比，CEPA处理样品的干重更高，表明乙烯促进了细菌纤维素的生成。
菌膜分析是细菌纤维素生产的常规分析工具。pH值和形态学分析在文本方案中有详细说明。准备时，从起始培养物中三批重复收获细胞，并使用佩特里夫-豪泽计数室对细胞进行定量。
然后，配制四种不同CEPA浓度的培养基母液。对于每种母液，取60毫升pH 7的SH培养基，并分别加入120微升的0、5、50或500毫摩尔CEPA储备液，以获得终浓度分别为0、0.01、0.1或1.0毫摩尔的CEPA。通过轻轻旋转烧瓶混匀这些培养基。
每组三个重复实验各需一份培养基，另需第四份作为无菌对照。因此，将每份60毫升的培养基分为四份，每份14毫升。然后，在接种相应的起始培养物之前，先将14毫升的培养基预冷，以达到每毫升100,000个细胞的最终浓度。
将所有接种后的试管置于冰上，以防止纤维素的产生。将剩余的14毫升等分试样用于无菌对照孔。现在，从每份14毫升主混合液中，取2毫升等分试样加入无菌24孔板的六个孔中，每种起始培养物共分析四块加样板。
用石蜡膜小心密封培养皿，并在30摄氏度下静置培养七天。收集培养皿中的浮膜时，按压浮膜的一侧以抬高对侧边缘，然后用镊子夹起。
接下来，将菌膜逐个转移至六孔板的孔中。加入12毫升0.1当量的氢氧化钠，在80摄氏度下处理20分钟以裂解细胞。然后，移除氢氧化钠溶液，并在六孔板中加入12毫升超纯水，充分洗涤处理后的菌膜24小时，期间持续振荡以中和样品。
孵育期间，每6小时更换一次水。孵育结束后，菌膜应呈白色。随后将菌膜置于硅胶垫上，在50摄氏度下干燥48小时，以备干重测定。