一种基于多孔板液体的筛选C. elegans基因敲低的实验方法

取一个含琼脂培养基的多孔板，其上已预先点种RNAi细菌，这些细菌含有或不含靶向秀丽隐杆线虫（C. elegans）基因的基因特异性插入片段。

将同步至L1期的线虫接种到孔板中，并孵育使其摄食RNAi细菌。

插入片段可产生靶向特定线虫基因的干扰RNA，从而引发基因特异性的基因沉默表型。

向孔中加入缓冲液，并轻轻重悬线虫。

将悬液转移至深孔板中，让线虫通过重力自然沉降。

吸去上清液，保留部分缓冲液。

用缓冲液洗涤线虫，然后弃去上清液，保留少量缓冲液。

接着，取一个含有致病菌的多孔检测板。

将确定数量的对照和基因敲低线虫分别加入到相应的孔中，以启动宿主-病原体相互作用。致病菌会分泌诱导线虫死亡的化合物。

通过比较线虫死亡率来评估基因特异性敲低对线虫存活的影响。

向一个24孔板的每孔中加入1毫升S基础培养基，每孔含有300条线虫。通过轻轻振荡培养板使线虫混匀，然后将线虫转移至一个新的无菌24深孔板中。

让线虫在重力作用下自然沉降，约五分钟。吸除上清液，每孔保留约一毫升。然后向每孔加入7毫升S基础培养基。重复洗涤两次，最后一次洗涤后，吸除上清液，仅保留约400微升。

为避免细菌饥饿，先将细菌移液至384孔板中，然后利用蠕虫分选仪的重取样功能，将22条蠕虫分选至每个384孔板的孔中。最后，在分选完成后，加入小分子或其他实验所需的材料。