用于筛选 秀丽隐杆线虫 敲低的多孔液体测定

0 views • 2:35 min • September 26th, 2025

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取一个多孔板,里面装有预先点有RNAi细菌的琼脂培养基,有或没有靶向 秀丽隐杆线虫 基因的基因特异性插入片段。

将同步的 L1 期蠕虫接种到孔中并孵育以允许以 RNAi 细菌为食。

该插入片段产生靶向特定蠕虫基因的干扰 RNA,产生基因特异性敲低表型。

向孔中添加缓冲液并轻轻重悬蠕虫。

将悬浮液转移到深孔板上,让蠕虫通过重力沉降。

除去上清液,保留一些缓冲液。

用缓冲液洗涤蠕虫,然后弃去上清液,留下少量缓冲液。

接下来,取一个含有病原菌的多孔测定板。

将规定数量的对照蠕虫和敲低蠕虫分配到各自的孔中,以实现宿主-病原体相互作用。病原菌分泌诱导蠕虫死亡的化合物。

比较蠕虫死亡率以评估基因特异性敲低对蠕虫存活的影响。

每孔添加一毫升 S Basal 每孔含有 300 条蠕虫的 24 孔板。通过摇动板轻轻搅拌蠕虫,然后将蠕虫转移到空的无菌 24 深孔板中。

让蠕虫在重力作用下沉降,大约五分钟。吸出上清液,每孔留下约一毫升,然后向每个孔中加入7毫升S基础。再重复洗涤两次,然后在最后一次洗涤后吸出除约 400 微升外的所有上清液。

将细菌移液到384孔板中以避免饥饿后,使用蠕虫分选机的重采样器功能,将22条蠕虫分选到384孔板的每个孔中。最后,分选后,添加小分子或其他实验特定材料。

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Last updated: 18 July 2026