0 次观看 • 3:57 分钟 • September 26th, 2025
从在琼脂培养基上培养的致病性细菌开始。
刮取细菌，将其悬浮于缓冲液中，并加入培养基以维持细菌活性。
将悬液分装至微孔板中。
接下来，取具有不同病原体易感性的 C. elegans 幼虫品系，包括易感性增加或抗性增强的品系，让其沉降。
移去上清液，将幼虫重悬于新鲜培养基中，并转移至含有细菌的微孔板中。
用透气膜密封微孔板并进行孵育。细菌会分泌有毒代谢产物，激活应激通路，导致细胞死亡。
洗涤各孔以去除细菌，加入细胞非渗透性荧光染料，并进行孵育。
该染料仅能穿透细胞膜已受损的死亡幼虫细胞，并与这些细胞的核酸结合。
洗涤以去除多余的染料，并对荧光染色的线虫进行成像，以评估敏感株和耐药株的死亡率。
进行液体杀伤实验时，使用细胞刮刀从SK平板上刮取P. aeruginosa，并将其重悬于约5毫升S基础培养基中。
使用分光光度计测定细菌悬液在600 nm处的光密度（OD 600）。在S基础培养基中制备24毫升铜绿假单胞菌（P. aeruginosa）稀释菌液，使其OD 600等于0.09，然后加入21毫升液态SK培养基，并使用多通道移液器将45微升菌液与培养基混合物转移至384孔板的每个孔中。将线虫从原培养体系中冲洗至50毫升锥形管中，并让其在重力作用下自然沉降。
吸去上清液至5毫升，然后总共使用50毫升S基础液重悬线虫，并重复洗涤两次。根据文本方案，使用线虫分选仪将约22条线虫分选至384孔板的每个孔中，然后用透气膜密封孔板，在25摄氏度下孵育24至48小时。在预定时间，使用微孔板洗涤仪和S基础液对384孔板总共洗涤5次。
最容易犯的错误之一是在线虫完全沉降之前就吸走上清液。准确判断线虫是否已完全沉降需要一定的经验。在最后一次洗涤后，将上清液吸除至剩余 20 微升。
然后，每孔加入 50 微升浓度为 0.98 微摩尔的核酸染料，使终浓度为 0.7 微摩尔。将培养板在室温下孵育 12 至 16 小时。在完成所需的孵育时间后，使用微量滴定板清洗仪至少清洗培养板三次。
进行数据采集时，使用分光光度计或自动化显微镜对透射光和荧光进行成像。