RNAi 表达细菌的培养与维护

从含有预先培养的RNA干扰（RNAi）细菌的平板开始。

这些细菌携带含有抗生素抗性基因和靶基因插入片段的质粒，该插入片段可产生双链RNA（dsRNA），从而抑制宿主中特定基因的表达。

使用无菌的枪头，将菌落转移至含有抗生素的深孔板培养基中。

在振荡条件下孵育培养板，以促进细菌均匀生长，其中深孔可提供通气。

抗生素可消除不含质粒的细菌，从而确保只有携带质粒的细菌能够存活。

离心培养板以分离细菌，并弃去上清液。

将细菌重悬于缓冲盐溶液中以使其稳定。

将重悬的细菌加入含有补充了抗生素和诱导剂的营养丰富的培养基的多孔板中。

抗生素用于筛选含质粒的细菌，而诱导剂则触发双链RNA的表达。

接种了表达RNAi细菌的培养板已准备好用于后续实验。

为了在24孔深孔板的一个孔中平行测试多种RNAi细菌菌株，从先前制备好的含RNAi的细菌克隆中分别挑取单菌落，接种至4毫升添加羧苄青霉素的LB培养基中。将培养板置于专为多孔板设计的摇床培养箱中，在37摄氏度、950 rpm条件下培养16小时，然后在2,000 g离心5分钟收集细菌。通过将板倒置并用力振荡，弃去上清液。

用 100 微升 S 培养基重悬 RNAi 细菌。将重悬的细菌用移液器加入含 IPTG 和羧苄青霉素的多孔 NGM 培养板的相应孔中，并让培养板干燥。