0 次观看 • 2:14 分钟 • September 26th, 2025
从携带发光操纵子的海洋生物发光细菌菌株开始,该操纵子编码荧光素酶及底物合成所需的酶。
在富含营养的琼脂平板上划线接种该菌株,并添加人工海水以模拟其天然盐度,促进其生长。
孵育以获得单菌落,然后挑取单个菌落并接种于含人工海水的液体培养基中。
在振荡条件下孵育,以促进过夜培养中处于指数生长期的生长。
将过夜培养物的确定体积转移至新鲜培养基中,并进行孵育以增加细菌密度。
随着种群扩增,细菌会释放自诱导剂,这些信号分子不断积累并扩散进入细胞,与细胞内受体结合,从而激活发光操纵子。
这种激活会诱导荧光素酶的表达以及底物的生物合成。
荧光素酶催化底物氧化,发出蓝绿色光。
通过监测培养物的生物发光情况,作为海洋细菌中发光操纵子激活及发光现象的指示。
根据文本方案配制培养基后,将细菌发光菌株划线接种于人工海水培养基琼脂平板上,并在24至30摄氏度下培养过夜。
通过从平板上挑取单菌落接种至100毫升人工海水培养基中,制备过夜培养物。随后在24至30摄氏度、120转/分钟的条件下过夜培养。次日,取8毫升过夜培养物接种至800毫升人工海水培养基中。
将细菌细胞在 24 至 30 摄氏度、120 RPM 条件下培养,并观察细胞直至其开始发光。
本文展示了海洋生物发光细菌的培养与原位监测方法,用于研究群体感应介导的发光操纵子激活过程。该实验方案可实现对细胞密度和发光强度的实时观察,有助于深入理解微生物间的通讯机制及基因表达调控。
对海洋细菌中发光操纵子激活进行实时监测,可直接定量读取群体感应介导的基因表达。该技术能力可实现微生物通讯和基因调控研究中的早期靶点验证和机制去风险化。该方法可在发现研究流程中,为通路解析和功能基因组学提供可预测的可信度支持。
该方法可融入微生物系统中从早期假设验证到检测方法开发及转化研究的整个发现过程。
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最后更新:22 八月 2026