0 次观看 • 3:27 分钟 • September 26th, 2025
从一株经抗生素预处理的大肠杆菌（E. coli）培养物开始。
这种抗生素可阻断细胞分裂，导致形成DNA含量增加的细长丝状细胞。
取部分培养物接种于营养丰富的琼脂平板上，并进行培养。
丝状细胞虽持续生长但不分裂；只有非丝状细胞能够形成菌落，导致菌落数量偏低。
稀释剩余的细菌培养物，并加入荧光DNA结合染料。然后在避光条件下孵育。
染料进入细胞并与DNA结合。
涡旋混匀样品，然后通过流式细胞仪进行检测。
每个细胞散射的光量与其大小相对应。
同样，染料结合的核酸所发出的荧光表明了细菌的DNA含量。
经抗生素处理的细胞表现出增强的散射光和荧光，反映出丝状生长以及在无细胞分裂情况下的持续DNA复制。
这展示了由抑制细胞分裂的抗生素引起的细菌生理学变化。
在新鲜培养基中对200微升的培养样品进行10倍系列稀释，直至10的负7次方。
每次稀释后通过轻微涡旋或倒置试管进行混匀。取100 µL适当稀释液接种于非选择性LB琼脂平板上，37°C过夜培养。次日计数菌落数量，以确定每种培养样品中活细胞的浓度。
将未处理和已处理的细胞培养物的每毫升菌落形成单位（CFU）随时间的变化绘制成图。使用分光光度计测定培养物在600 nm处的光密度（OD 600）。用4°C的新鲜培养基稀释培养样品，使稀释后样品的OD 600达到0.06，相当于每微升约15,000个细胞。
进行DNA染色时，将稀释后的细菌样品与浓度为10微克/毫升的DNA荧光染料溶液按1:1的体积比混合，并在避光条件下孵育15分钟。上样前，通过轻微涡旋或轻柔颠倒离心管的方式混匀样品。将样品以每分钟约120,000个细胞的流速注入流式细胞仪中。
使用适当设置获取前向散射光、侧向散射光以及DNA荧光染料/荧光信号。