0 次观看 • 3:05 分钟 • September 26th, 2025
细菌芽孢由于含有肽聚糖皮层结构而保持休眠状态，该皮层是由糖类和氨基酸组成的聚合物。
在萌发过程中，皮层降解并释放糖类到周围培养基中。
为了检测皮层降解，首先取在孢子萌发过程中特定时间点收集的含有释放糖类的培养基。
使用浓度递增的糖标准品作为参照。
标准品和样品需经过预处理，以将糖类转化为反应性形式。
使用 Ehrlich 试剂孵育，该试剂是一种比色检测试剂，可与糖类反应并形成紫色复合物。
将混合物转移至多孔板中，使用酶标仪测定有色复合物的吸光度。
吸光度对应于紫色的深浅，其与糖浓度成正比。
不同时间点样本的吸光度增加表明皮质逐渐降解。
根据标准品浓度绘制标准曲线，并定量样品浓度。
在样品置于冰上的同时，配制显色试剂。将 0.320 克二甲基对氨基苯甲醛（DMAB）溶解于 1.9 毫升冰醋酸中。注意该试剂对时间、温度和光线敏感，不应提前配制。
待DMAB完全溶解后，加入100 µL 10 N盐酸并涡旋混匀样品。然后加入5 mL冰醋酸，再次涡旋混匀。进行比色反应时，将每份冷却后的皮质样品或对照样品各100 µL转移至新的1.5 mL微量离心管中。
向每个样品中加入700微升 freshly prepared color solution。立即将样品转移至37摄氏度水浴中，准确孵育20分钟。孵育结束后，将每个样品中的200微升转移至透明的96孔板中。
样品初始应呈黄色，但如果存在还原糖（表明皮质存在），颜色将变为紫色。在此，许多样品未显示出明显的紫色。然而，250、500 和 5,000 纳摩尔的样品在视觉上与阴性对照（0 纳摩尔）存在差异。
使用酶标仪测定585纳米处的吸光度。在585纳米光密度下测得的标准样品信号最符合线性回归。