细菌孢子萌发过程中皮质降解的比色检测

0 次观看3:05 分钟 • September 26th, 2025

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由于肽聚糖皮层(糖和氨基酸的聚合物)而细菌孢子保持休眠状态。

在发芽过程中,皮层降解将糖释放到周围培养基中。

要检测皮层降解,请从含有释放糖的培养基开始,这些糖在孢子萌发期间的规定时间点收集。

使用增加浓度的糖标准品作为参考。

标准品和样品经过预先处理,将糖转化为反应形式。

与埃利希试剂一起孵育,埃利希试剂是一种比色检测试剂,可与糖反应并形成紫色复合物。

将混合物转移到多孔板上,并使用酶标仪测量有色复合物的吸光度。

吸光度对应于紫色强度,紫色强度与糖浓度成正比。

时间点样本吸光度的增加表明皮层逐渐退化。

根据标准浓度生成图表并量化样品浓度。

当样品在冰上时,准备颜色试剂。将 0.320 克 DMAB 溶解在 1.9 毫升冰醋酸中。请注意,该试剂对时间、温度和光敏感,不应提前制作。

DMAB完全溶解后,加入100微升10正盐酸,涡旋样品。然后加入五毫升冰醋酸,再次涡旋。对于比色反应,将每个冷却皮层或对照样品的 100 微升转移到新的 1.5 毫升微量离心管中。

向每个样品中加入 700 微升新鲜制备的色溶液。立即将样品转移到 37 摄氏度的水浴中,并将样品孵育 20 分钟。孵育后,将每个样品的 200 微升转移到透明的 96 孔板中。

样品一开始应该是黄色的,但如果存在还原糖(表明皮质的存在),样品就会变成紫色。在这里,许多样品没有显示可见的紫色。然而,250、500 和 5,000 纳摩尔样品在视觉上与阴性对照零纳摩尔不同。

使用酶标仪,确定 585 纳米处的吸光度。当以 585 纳米的外径测量时,从标准样品产生的信号最适合线性回归。

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最后更新:1 八月 2026