0 次观看 • 2:50 分钟 • September 26th, 2025
从一种编码带有囊泡成核肽（Vesicle Nucleating Peptide，简称 VNp）标记的重组蛋白的细菌物种培养物开始，VNp 是一种促进囊泡形成的短肽。
向培养物中加入诱导剂并进行孵育。诱导剂可触发蛋白质表达。
VNp 嵌入内膜并促进膜弯曲，将带有 VNp 标签的蛋白质包裹进出芽的小泡中。
将富含囊泡的培养基转移至离心管中，离心以分离富含囊泡的上清液。
接着，过滤上清液以去除残留的污染物。
然后，将滤液通过另一张膜滤器，以截留囊泡于膜表面。
将膜置于培养皿中，并加入磷酸盐缓冲液。
轻轻脱离囊泡，并将悬液转移至洁净的离心管中。
超声处理悬浮液，以破坏囊泡膜并释放蛋白质。
离心裂解液以分离膜碎片。
所得上清液含有纯化的重组蛋白，可直接用于分析。
通过加入IPTG至终浓度最高为20微克/毫升（84微摩尔），诱导T7启动子驱动的重组蛋白表达。诱导足够时间后，在4摄氏度、3000 ×g条件下离心20分钟，收集细胞沉淀。将上清液通过无菌且无去垢剂的0.45微米PES滤膜过滤，以对含有囊泡的培养基进行除菌，便于长期保存。
为了将囊泡浓缩至较小体积，将含有囊泡的无菌培养基通过一个无菌且无去污剂的0.1微米MCE滤膜过滤。然后，用0.5至1毫升无菌磷酸盐缓冲液（PBS）轻柔地冲洗滤膜，并使用细胞刮棒或塑料涂布器小心地将囊泡从滤膜上剥离。使用移液器将囊泡浓缩液转移至新的微量离心管中。
纯化的囊泡可在4摄氏度下保存。在无菌培养基中，采用适当的程序对含有蛋白质的囊泡进行超声处理，以破坏囊泡的脂质膜并释放蛋白质。将超声处理后的悬液在39,000 g、4摄氏度条件下离心20分钟，以去除囊泡碎片。