通过电穿孔法转染野生型阿米巴并辅以细菌喂养

从悬浮于冷缓冲液中的野生型 Dictyostelium discoideum 变形虫细胞开始。

缓冲液提供了维持膜稳定的离子环境。

接下来，将阿米巴细胞加入含有目标基因质粒的离心管中。

轻轻混匀溶液，使质粒与变形虫表面充分接触。

将该混合物转移至预冷的电穿孔杯中，并进行电穿孔。

电穿孔过程中，电脉冲会在细胞膜上形成瞬时孔隙。

质粒通过这些孔进入细胞质，随后转位至细胞核。

接下来，将阿米巴细胞转移至含有添加了食料细菌的液体培养基的培养皿中。

变形虫通过吞噬作用摄取细菌，为细胞恢复提供必需的营养，并实现质粒表达。

饲养细菌可在无需特殊无菌培养菌株的情况下，支持野生型变形虫细胞的转染。

用 H40 缓冲液重悬细胞。

接下来，将100微升细胞加入含有1至2微克DNA的离心管中。用移液器吹打混匀，然后将细胞与DNA的混合物转移至预冷的电穿孔比色皿中。

加入的DNA不得超过2微克。较高的DNA浓度对细胞具有毒性，并会降低转染效率。

电穿孔后，立即将细胞转移至预先准备好的10厘米培养皿中，并让细胞恢复5小时。