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微生物学
0 次观看 • 3:00 分钟 • October 30th, 2025
取结核病变中坏死、富含脂质的干酪样物质的均匀悬浮液，其核心含有耐药性分枝杆菌。
将待测药物加入匀浆中，并涡旋以促进其与干酪样基质的相互作用。
将含有快速平衡透析插件的供体室和受体室（两者由半透膜隔开）放入底板中。
将添加药物的匀浆液加入供体室，并向接收室中加入缓冲液。
密封培养板并旋转孵育。
孵育期间，游离药物会穿过膜，在两个腔室之间达到平衡。
达到平衡后，用缓冲液稀释供体样品，并用不含药物的匀浆液稀释受体样品，以使药物定量时的基质条件保持一致。
最后，定量测定药物浓度，并计算游离药物分数（fu）。
fu 反映了游离药物扩散进入干酪样物质并到达耐药分枝杆菌的可用性。
将6.5微升制备好的待测化合物加入643.5微升匀浆液中，使其终浓度为5 µM，并涡旋混匀。
接下来，将红色插件放入底板中。每项检测的每种化合物均需设置三个复孔，并准备好相应的插件。
向每个红色插件的红色供体室中加入 200 微升添加药物的基质。然后，向每个接收室中加入 350 微升 PBS。
将粘性封膜贴于板上，置于37摄氏度的温控混匀仪中，以每分钟200转的速度孵育4小时。孵育结束后，通过上下吹打两到三次，轻轻混匀供体室和受体室中的内容物。从每个供体室中转移20微升匀浆液至含有20微升新鲜PBS的1.5毫升离心管中。
同样，将接收室中的 PBS 样品各 20 微升转移至 20 微升新鲜匀浆液中。
基质匹配消除了在均质液和PBS中分别建立两条色觉曲线以进行定量分析的需要。供体室中的内容物可能随时间发生沉降。在取出等分试样前，应通过移液轻轻混匀内容物。