制备单克隆细菌培养物的技术

从细菌培养物开始，进行连续稀释以降低细胞密度。

取少量最终稀释液，点样于琼脂平板上。

加入无菌玻璃珠，轻轻摇动培养板，以确保细胞的空间分离，这对于获得良好分离的单菌落至关重要。

移除玻璃珠，然后将培养皿倒置并进行培养。

单个细胞增殖并形成独立的菌落，从而产生单克隆培养物，其中每个菌落均由遗传上均一的细菌群体组成。

挑取单个菌落，转移至含有液体培养基的独立试管中。

在振荡条件下孵育试管。孵育结束后，测定每种培养物的浑浊度。

悬浮在培养基中的细菌细胞会散射光线，导致随着细胞密度的增加，培养物显得更加浑浊。

选择浊度最高的试管，其代表最密集的单克隆细菌群体，用于后续实验应用。

将装有 100 毫升 LB Lennox 肉汤的三个瓶子分别标记为一号、二号和三号。

用移液器将0.1毫升的细菌培养液移入1号瓶中。盖紧瓶盖，用手轻轻摇晃一分钟，使溶液混匀。接着，从1号瓶中吸取0.1毫升液体移入2号瓶中。再次盖紧瓶盖，用手摇晃一分钟。最后，从2号瓶中吸取0.1毫升液体移入3号瓶中，完成最后一次稀释。盖紧瓶盖，用手摇晃一分钟。

然后将20微升溶液分别移液至四个培养皿中。接着，将四个经高压灭菌的直径为三毫米的玻璃珠放入每个培养皿中。盖上培养皿盖，手动振荡一分钟。

实验完成后，将培养皿倒置，于37°C培养箱中培养24小时。

用不锈钢刮勺从四个培养皿中挑取得到的单克隆细菌，分别放入剩余的七支含有12.5毫升LB Lennox肉汤的试管中。将试管置于37摄氏度培养箱中培养24小时，然后采用目视比色法挑选出光散射最强的一支。