细胞活力分析 Microcystis aeruginosa 使用流式细胞术

分别采集活体和死亡的 Microcystis aeruginosa 细胞样品。

混合样品以创建合并的群体。

Microcystis 含有藻蓝蛋白，这是一种在活细胞中保持完整的自发荧光色素，但在死细胞中会降解。

涡旋振荡样品以打破团块，制备均匀的单细胞悬液。

加入一种细胞膜不渗透的、可结合核酸的荧光探针，并将样品在避光条件下孵育，以防止光漂白。

该探针通过死细胞受损的细胞膜选择性地进入细胞，并与细胞内的DNA结合。

使用适当的激发波长激光，通过流式细胞仪检测样品的藻蓝蛋白自发荧光和核酸探针荧光。

活细胞发出强烈的藻蓝蛋白自发荧光，但无探针信号。

相比之下，死亡细胞表现出色素发射减弱和探针荧光增强，证实了细胞膜损伤。

这使得能够从死细胞中识别出富含色素的活细胞。

为了优化分子探针的细胞摄取，将先前准备的单层培养物的一半置于适当的条件下，以生成死亡对照。检查样品微环境的变化，以确认培养物的死亡。然后按照刚刚演示的方法解离集落形成。

接下来，选择一个488纳米的激光器，并配以能够检测绿色和橙色核酸探针荧光信号的检测器；同时使用640纳米的激光器，通过相应的检测器记录藻蓝蛋白信号。