制备人工痰液培养基以在体外模拟囊性纤维化肺部痰液

囊性纤维化（CF）是一种遗传性疾病，会导致肺部积聚浓稠且黏滞的黏液，形成痰液，从而促进致病性微生物的生长。

为了制备人工囊性纤维化痰液，需取用具有关键生化特性的溶液。

黏蛋白混合物含有黏蛋白，这些是高分子量的糖蛋白，用于模拟囊性纤维化痰液的黏度并促进微生物黏附。

该化学混合物提供支持微生物代谢所需的离子和葡萄糖。

生物混合物为微生物生长提供营养物质。

将所有成分混合以制备人工痰液培养基（ASM）。

添加缓冲剂以维持弱酸性 pH 值，有利于病原体存活。

为对培养基进行灭菌，将ASM转移至带有膜滤器的真空过滤装置中。

在搅拌条件下过滤，以避免黏蛋白聚集并防止滤器堵塞。

真空将培养基抽滤通过滤膜，从而去除微生物污染物和大分子聚集体。

ASM 培养基已准备好用于培养与囊性纤维化相关的微生物。

通过将250毫升ASCM加入含有ASMM的1升瓶中来制备人工痰液培养基。然后，向培养基瓶中加入250毫升ASBM。使用1摩尔的MOPS碱性缓冲液对培养基进行滴定，直至pH试纸显示pH值达到6.3。

将人工痰液培养基在 4 摄氏度下冷藏，直至进行过滤。然后，为开始过滤过程，将 200 毫升未过滤的人工痰液培养基转移至带有孔径为 0.22 微米滤膜的真空过滤系统中。将过滤系统连接至真空泵后，启动真空泵。随后，将滤器置于低温室中 4 摄氏度的旋转摇床上，以每分钟 90 转的速度振荡。

为避免堵塞问题，在过滤350毫升培养基后更换滤膜。当过滤了相当体积的培养基后，额外加入150毫升培养基进行过滤。重复使用新的滤室进行过滤，直至所有培养基均被过滤完毕。