利用植物根系分泌物处理细菌以模拟体外植物-微生物相互作用

取一株保藏菌种 芽孢杆菌 mycoides一种促进植物生长的根际细菌，将接种物划线接种于培养平板上。

孵育培养板，以促进细菌增殖形成菌落。

将单个菌落接种至液体培养基中，并在振荡条件下培养以促进细菌生长。

使用液体培养基稀释菌液，以达到检测所需的最适密度。

向培养物中添加马铃薯根系分泌物，以模拟植物-微生物相互作用。

在振荡条件下孵育培养物，以促进信号分子与细菌受体之间的相互作用。

这种相互作用会诱导信号通路，从而激活调控蛋白，后者结合DNA并改变基因表达。

将菌液转移至离心管中，离心使细菌细胞沉淀成团。

弃去上清液，并将试管浸入液氮中以瞬时冷冻细胞。

保存用于分析植物根系分泌物诱导的细菌基因表达变化的细胞。

为了培养细菌，从–80摄氏度的甘油保存菌种中挑取一环 B. mycoides 菌株，划线接种于LB琼脂平板上，在30摄氏度条件下培养过夜。然后挑取平板上的单菌落接种至LB液体培养基中，在30摄氏度、200 rpm条件下于摇床中振荡培养过夜。

为处理和取样细菌，将过夜培养的B. mycoides菌液用90毫升预热的LB培养基稀释，使300毫升锥形瓶中的初始OD₆₀₀为0.05。随后向菌液中加入10毫升根系分泌物，并以10毫升无菌去离子水处理作为对照。然后在30°C下孵育一小时。

一小时后，将培养物转移至50毫升离心管中。在4°C条件下，以9,000 × g离心2分钟收集培养物中的细胞。随后弃去上清液，并立即用液氮速冻沉淀。

然后将其储存在 -80 摄氏度，直至使用。