金属限制条件下细菌生长实验：研究金属响应基因功能

取野生型细菌和缺失野生型中特定金属响应基因的突变型细菌。

将细菌培养在金属耗尽的培养基中，以耗尽其内部金属储备。

在这种金属缺乏的环境中，野生型细菌中金属响应基因被激活，并表达一种表面受体，而突变型细菌则缺乏该受体。

稀释培养物以确保细胞密度均匀。

取一个含有金属-蛋白质复合物的多孔板。

将稀释后的培养物加入孔板中。

将培养板置于保持恒定温度并振荡的酶标仪中孵育，以促进细菌的最佳生长。

定期测定吸光度，以监测细菌随时间的生长情况。

在野生型细菌中，金属受体能够从复合物中提取金属离子，从而支持其生长。

突变细菌由于缺乏金属离子受体，无法从复合物中提取金属离子，因而表现出生长受限。

取 10 微升 10X 预混液和 90 微升 CDM，加入三个孔中，作为空白对照。

当侧臂烧瓶中的培养物数量翻倍后，取每种培养物100微升加入到微孔板中未使用的一个孔内，并在600纳米处测定光密度。

计算出将菌液稀释至600纳米处光密度为0.02所需的正确稀释倍数后，用化学成分明确培养基（CDM）在小型培养管中稀释菌液，并加入足够体积将96孔板中的10倍预混液稀释至1倍浓度。

然后，将培养板放入酶标仪中，在600纳米波长下，以设定的实验时间间隔，振荡培养8至12小时，测定吸光度值。