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微生物学
0 次观看 • 2:51 分钟 • October 30th, 2025
从一种非分型的Haemophilus influenzae菌株开始，该菌株是人类呼吸道病原体。
将细菌培养物划线接种于富含营养的选择性培养基上，并在CO₂条件下培养2富集条件以模拟呼吸道环境。
孵育期间，细菌利用营养物质并大量繁殖，形成菌落。
将菌落转移至选择性液体培养基中，并在液体培养条件下孵育以促进细菌生长。
将一份等分试样转移至微量离心管中。
离心以分离细菌，并弃去上清液。
将细菌重悬于缓冲液中，再次离心以洗涤并分离细菌，弃去含有残留培养基的上清液。
用缓冲液重悬细菌并稀释。
使用分光光度计在 600 nm 处测量光密度，以估算细菌浓度。
将稀释后的细菌培养物接种至选择性培养基上，培养以形成菌落。
计数菌落以计算菌落形成单位，用于制备后续实验所需的接种物。
将NTHI接种于巧克力琼脂平板上。在37摄氏度、含5%二氧化碳的条件下倒置培养过夜。次日，将细菌接种于脑心浸液肉汤中进行培养。
然后，在微量离心管中加入一毫升培养液。在室温下以 4,000 ×g 离心五分钟。弃去上清液，并将沉淀重悬于一毫升磷酸盐缓冲液（PBS）中。重复此洗涤步骤一次。
接下来，将100微升重悬液加入900微升PBS中稀释，测定菌液在600纳米处的吸光度。利用该数据将接种物浓度调整至每毫升2000万个CFU。
接下来，测定接种物的活力和菌落形成单位（CFUs）。将肉汤进行1到10倍的系列稀释，接种于巧克力琼脂平板上，培养过夜。