从小鼠模型中采集感染非分型流感嗜血杆菌后的支气管肺泡灌洗液 流感嗜血杆菌

从一只气管暴露的安乐死小鼠开始。该小鼠的肺部已预先感染了非分型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae），一种致病性细菌。

将导管插入气管，并连接至装有灌洗缓冲液的注射器。

加入含有抗凝剂以防止血液凝固和含糖物质以维持细胞完整性的洗涤缓冲液。

轻柔抽吸以回收含有红细胞、免疫细胞和残余病原体的支气管肺泡灌洗液。

重复该操作，并将收集的灌洗液合并至单一悬液中。

从混合的悬液中取出一份等分试样，离心以分离细胞。弃去上清液。

用裂解缓冲液重悬细胞，以选择性裂解红细胞。

离心以分离剩余的细胞，并弃去含有碎片的上清液。

用缓冲液重悬剩余的细胞。

含有免疫细胞和残留细菌的最终悬液已准备好用于后续分析。

暴露肺的腹侧以暴露气管。使用20号导管进行气管插管。

使用导管注入 0.8 毫升 BALF 缓冲液，并通过牙科吸引法收集灌洗液。重复此操作三次，将四次灌洗收集物合并至同一悬液中。

取100微升等分试样，以2,000 RPM离心两分钟。

吸去上清液，并用红细胞裂解缓冲液重悬沉淀。离心后，用1× PBS重悬沉淀。