蓝细菌培养物的光暗周期同步化及DNA压缩

从添加了硫代硫酸盐的营养丰富的琼脂平板开始。

划线接种蓝细菌，并在交替的光照与黑暗条件下培养，以维持其昼夜节律周期。

在光照期间，营养物质的吸收和硫代硫酸盐促进细菌生长以及DNA的凝聚。

在黑暗时期，细胞保存能量并进行分裂。

交替的明暗循环使细胞同步到相同的生长和分裂阶段。

光照期结束后，加入蔗糖溶液并反复吹打以释放蓝细菌，引起颜色变化。将细胞转移至离心管中。

加入DNA特异性荧光染料，并在避光条件下孵育。该染料可结合蓝细菌的DNA。

离心以分离蓝细菌，并移除上清液。

将蓝细菌重悬于蔗糖溶液中，将悬液转移至载玻片上，然后盖上盖玻片。

在荧光显微镜下，细胞中蓝色的浓缩DNA证实了蓝细菌细胞周期的同步性及其受昼夜节律的调控。

首先在含有1.5%琼脂和0.3%硫代硫酸钠的9厘米无菌BG-11平板上培养蓝细菌。将平板置于23°C、光照强度为每平方米每秒50微爱因斯坦（µE）、光暗周期为12小时光照/12小时黑暗的条件下培养。为维持细胞生长，需每周将其转接至新鲜的BG-11琼脂平板上。

一周内，培养物会呈现绿色条带。使用经火焰灭菌的接种环转移绿色的细胞团块，并在新培养板上划线接种。为观察DNA压缩情况，于光照周期结束时收集培养六天的细胞。

为使细胞从培养板上脱落，加入一毫升 0.2 摩尔的蔗糖溶液。随后收集细胞悬液，并重复添加和去除蔗糖溶液，直至溶液变为绿色。溶液颜色变化表明大部分细胞已被释放。

现在，将500微升悬浮细胞溶液转移至微量离心管中，加入Hoechst染料，使其终浓度为每毫升1微克。然后，将细胞在避光条件下孵育10分钟。接着，离心收集细胞，弃去上清液，并将细胞重悬于10微升0.2摩尔的蔗糖溶液中。

接着，取一微升悬浮液转移至载玻片上，加盖盖玻片，并在配备紫外滤光片的荧光显微镜下观察细胞。使用100倍油镜，寻找DNA压缩的证据，该现象应在大多数细胞中可见。