0 次观看 • 3:54 分钟 • October 30th, 2025
从集胞藻（cyanobacteria）培养物开始，集胞藻是一类光合细菌。
这些细菌含有富含脂质的质体小球粒滴和类囊体膜，后者是一种富含光合色素的折叠状膜结构。
离心培养物并弃去上清液，以去除细菌产生的胞外多糖。洗涤沉淀，然后将其重悬于缓冲液中。
使用高压均质机产生剪切力，以破坏细胞壁和细胞膜。
类囊体膜破裂会将光合色素释放到裂解液中。色素的释放会引起颜色变化，表明细胞已破碎且质体小球已被释放。
将裂解液加入离心管中，然后加入蔗糖溶液以形成密度梯度。
离心以按密度分离细胞组分。
类囊体及其他较重的组分沉淀到底部，而低密度的质体小球则上浮至顶部，形成一条明显的条带。
收集质体小球 fraction 并通过冷冻保存以用于进一步分析。
在BG11培养基中培养50毫升集胞藻（Synechocystis species PCC 6802）培养物，持续7至10天，直至进入稳定期。
使用分光光度计将细胞密度调节至在750纳米处的光密度为2.0。为去除多糖，离心50毫升培养液并弃去上清液。用50毫升缓冲液A重复洗涤细胞两次。
将洗涤后的沉淀重悬于25毫升缓冲液A中，使用法国压榨细胞器在1,100磅/平方英寸条件下破碎细胞。在低温条件下重复此过程三次，直至在白光下观察到裂解液颜色由绿色变为红-蓝-绿色。取出部分细胞匀浆，留作代表性的全细胞样品保存。
将所得匀浆分装至八个三毫升超速离心管中，每管最多装至2.5毫升。在匀浆上方覆盖400微升R培养基，形成阶梯梯度。离心前，根据需要添加额外的R培养基，仔细平衡各离心管。
类囊体及其他较重的细胞器（包括任何聚羟基烷酸酯颗粒）会形成沉淀，而质体小球则在蔗糖梯度顶部或靠近顶部的位置形成黄色油状层。用注射器收集浮在上方的粗提质体小球层，并将收集物转移至一个2毫升的离心管中。
必要时用针尖将质体小球从超速离心管管壁上刮下。可继续进行蓝细菌的处理，或将粗提的质体小球在-80摄氏度保存，后续再进行纯化。