评估无菌 C. elegans 中的肠道细菌定植

从悬浮于培养基中的无菌成年C. elegans线虫开始。

接种试验细菌并进行培养。

当线虫摄食时，细菌进入肠腔并附着于上皮。

离心以沉淀线虫，并去除未摄入的细菌。

用缓冲液重悬，离心并去除未被吞噬的细菌。

加入含有热灭活E. coli的培养基并进行孵育。

进食过程中，热灭活的大肠杆菌（E. coli）会置换并排出肠道腔内未黏附的待测细菌。

离心并移除含有排出细菌的上清液。

用缓冲液洗涤，离心并移除上清液。

将线虫置于冰上冷却以诱导其麻痹，防止继续摄食。

加入漂白剂溶液并孵育，以杀灭残留的外部细菌。

去除漂白剂并加入冷缓冲液。

离心并去除上清液，以清除残留的漂白剂。

此时，线虫仅保留附着在肠上皮上的可存活测试细菌，从而能够对定植情况进行定量分析。

首先，在微量离心管中用1毫升M9TX-01重悬线虫样品。通过离心收集成虫，并弃去上清液。使用相同的离心参数，用1毫升M9TX-01洗涤线虫两次，再用1毫升M9线虫缓冲液洗涤一次，以最大限度减少外部细菌。然后，将每个样品重悬于含有2倍量热灭活OP50的1毫升S培养基中，置于培养管内。在25°C下孵育20至30分钟，使未黏附的细菌从肠道中排出。

孵育后，用一毫升冰冷的 M9TX-01 缓冲液将虫体清洗两次，并弃去上清液。将离心管置于冰上 10 分钟，使线虫麻痹。随后，向每根离心管中加入一毫升含无香型漂白剂的冰冻 M9 线虫缓冲液。

将试管置于冰上孵育至少10分钟，以杀死外部细菌。弃去次氯酸钠缓冲液，并将试管放回冰上，防止线虫蠕动。随后，向每支试管中加入1毫升冰冷的M9TX-01溶液，在微型离心机中离心5秒。将试管重新放回冰上，吸除上清液。重复此步骤一次。