评估无菌 C. elegans 的肠道细菌定植

从悬浮在培养基中的无菌成年 秀丽隐杆线虫 开始。

引入测试细菌并孵育。

当蠕虫进食时，细菌进入肠腔并粘附在上皮细胞上。

离心以沉淀蠕虫并去除未摄入的细菌。

重悬于缓冲液中，离心，并去除剩余的未摄入细菌。

加入含有热杀死的大 肠杆菌 的培养基并孵育。

在喂养过程中，热杀死的大 肠杆菌 将未粘附的测试细菌从肠腔中排出并排出。

离心并除去含有排出细菌的上清液。

用缓冲液洗涤，离心，除去上清液。

将蠕虫放在冰上冷却以诱导麻痹，防止进一步摄入。

加入漂白剂溶液并孵育以杀死残留的外部细菌。

取出漂白剂并加入冷缓冲液。

离心并除去上清液以消除残留的漂白剂。

这些蠕虫现在只保留粘附在肠上皮细胞上的活测试细菌，从而能够量化定植。

首先将蠕虫样品重悬于微量离心管中的一毫升 M9TX-01 中。通过离心收集成虫并丢弃上清液。使用相同的离心参数，用一毫升 M9TX-01 冲洗蠕虫两次，用一毫升 M9 蠕虫缓冲液冲洗一次，以尽量减少外部细菌。然后，将每个样品重悬于培养管中的一毫升S培养基和2倍热热杀灭OP50中。将试管在 25 摄氏度下孵育 20 至 30 分钟，以将未粘附的细菌从肠道中排出。

孵育后，用一毫升冷M9TX-01冲洗清除的蠕虫两次，并弃去上清液。将管子放在冰上 10 分钟以麻痹蠕虫。然后，向每个试管中加入一毫升冰冷的 M9 蠕虫缓冲液和无味漂白剂。

将试管在冰上孵育至少 10 分钟，以杀死外部细菌。丢弃漂白剂缓冲液并将试管放回冰中，以防止蠕虫泵送。接下来，向每个试管中加入一毫升冷 M9TX-01，并在迷你离心机中离心五秒钟。将试管放回冰中并除去上清液。重复此步骤一次。