制备 嗜肺军团菌 用于冷冻电子断层扫描

从一株嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）开始，这是一种致病性细菌。

这些细菌细胞的膜上具有一种分泌系统，该系统对宿主感染至关重要。

将细菌细胞悬浮于无菌水中，以达到冷冻电子断层扫描（cryo-ET）成像所需浓度。

加入金纳米颗粒，作为三维重建过程中图像配准的参考点。

取一张带有穿孔碳膜的载网用于沉积细菌样品。

将网格放入充满气体的腔室中，并施加电击穿以增强表面的亲水性。

将悬液加至载网上，使液体在表面均匀铺展，并让细胞沉降。

去除载网上的多余水分，并将其迅速浸入液态冷冻介质中，以冻结样品并保存其细胞结构。

样品现已准备好进行细菌分泌系统的冷冻电子断层扫描成像。

为制备电子冷冻断层成像样品，将嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）在 CYE-琼脂-链霉素平板上于 37°C 培养 48 小时，使其形成浓密菌斑。

将细胞重悬于水中，使 OD₆₀₀ 约为 0.7。然后向 20 微升细胞悬液中加入 5 微升胶体金颗粒。对有孔碳膜载网进行辉光放电处理，并用移液器将 5 微升细胞混合液滴加到载网上。

静置一分钟。用滤纸吸去载网上的液体，然后使用重力驱动的压片装置在液态乙烷中将其冷冻。