培养快速生长的细菌 Vibrio natriegens

取一支含有培养物的试管 Vibrio natriegens一种快速生长的细菌。

离心培养物以沉淀细菌。弃去含有残留培养基的上清液。

将细菌沉淀重悬于新鲜培养基中，并转移至含有相同培养基的锥形瓶中，用于细菌培养的制备。

在通气条件下振荡培养该培养物。

由于世代时间较短，Vibrio natriegens 能够利用营养物质并快速分裂，从而生成高浓度的细菌群体。

使用分光光度计定期监测光密度（OD），以确定细菌浓度。

培养至OD值达到约1，表明细胞处于具有高代谢活性的指数生长期。

将培养物转移至离心管中。

在低温下离心，以分离细菌并保持细胞完整性。

将试管置于冰上，移除含有细胞碎片的上清液。

将细菌沉淀物储存于超低温条件下，用于后续分析。

首先，将1 mL过夜培养的Vibrio natriegens菌液在台式离心机中以10,600 × g离心1分钟，进行洗涤。

吸除上清液，注意不要扰动沉淀，然后将沉淀重悬于1毫升新鲜的LB-V2培养基中。取1毫升洗涤后的过夜培养物，接种到一个无菌的4升带挡板的锥形瓶中的1升新鲜LB-V2生长培养基内，瓶口覆盖无菌盖，以达到1:1000的稀释比例。在30°C、225 RPM振荡条件下培养菌液。

使用分光光度计监测培养物在 600 nm 处的光密度（OD 600），当其达到 1.0 ± 0.2 时，将培养物分装至两个 500 毫升离心管中，在 4 °C 条件下以 3,500 × g 离心 20 分钟收集菌体，随后置于冰上。吸除上清液，并立即处理沉淀物。