在无氧条件下制备厌氧污泥培养物

从一个装有蒸馏水的烧瓶开始。

将水煮沸以去除溶解氧，尽量减少可能抑制厌氧生长的残余氧气。

在持续通入氮气以防止氧气重新溶解的同时，将水冷却。

将烧瓶置于天平上，并加入固定量的厌氧消化池污泥。

污泥中含有多种厌氧微生物和残留的有机物质。

加入氮气后立即用橡胶隔膜密封烧瓶，以维持厌氧条件。

振荡培养以均匀分散厌氧细菌，并通过增强与污泥中有机物的接触来促进其代谢。

无氧环境可防止氧化应激引起的代谢损伤，从而使专性厌氧菌得以增殖。

孵育结束后，让较大的污泥颗粒沉降。

接下来，使用注射器抽取厌氧接种物。

将接种物转移至含有无氧培养基的血清瓶中，以促进厌氧细菌的存活。

为从厌氧消化器制备接种物，向烧瓶中加入 400 毫升蒸馏水并加热至沸腾。

在持续用氮气冲洗顶空的同时，将其冷却至约 30 摄氏度。加入约 100 克来自厌氧消化池的污泥，并确保记录污泥的精确质量，以便确定稀释倍数。用氮气置换烧瓶的顶空，然后用丁基橡胶隔垫密封。

将锥形瓶在120 rpm条件下振荡30分钟。静置，使较大的污泥颗粒沉降。然后使用注射器和套管吸取5毫升接种物，并将其注入预先准备好的血清瓶中。