使用基于注射器加压法提取质外体细菌

0 次观看2:28 分钟 • November 28th, 2025

取一株叶片预先接种了细菌的拟南芥(Arabidopsis)植株,以研究植物-微生物相互作用。

这些细菌在植物细胞间的细胞间隙(即质外体)中增殖,形成微菌落。

一旦建立质外体定植,切除叶片并将其放入无针头的注射器中。

加入蒸馏水以浸没组织。

插入活塞,然后将注射器竖直握住,轻弹注射器,并调节活塞以排出任何被困的空气。

用封口膜密封尖端,以形成封闭的质外体提取腔室。

推动活塞施加正压,直至组织变暗,表明组织受到压缩且水已进入细胞间隙,从而将细菌从间隙中冲出。

接下来,通过拉动活塞施加负压,以扩张组织基质并抽出液体和细菌。

重复进行压力循环,以产生剪切力破坏微菌落,从而在不损伤植物组织的情况下释放细菌。

打开注射器,收集含有分散细菌的质外体液体,用于后续分析。

接种后第四天,剪取地上部分 拟南芥 将植物或接种过的菜豆叶片放入一支20毫升无针头的注射器中。

对于豆类叶片,将叶片自身卷起,使远轴面朝外。加入足量蒸馏水以浸没组织。然后,将装有活塞的注射器竖直插入,轻轻敲击注射器筒体以排出内部多余的空气和气泡,使所有空气聚集至尖端附近;排尽空气后,用石蜡膜封住注射器筒体的尖端。

现在小心按压柱塞以产生正压,直至组织颜色变深。然后,回拉柱塞以产生负压。移除石蜡膜和柱塞,并收集含有质外体提取细菌的液体。