0 次观看 • 2:48 分钟 • November 28th, 2025
取含有链置换DNA聚合酶、核苷酸和双链DNA结合染料的预混液，用于环介导等温扩增（LAMP）。
添加含有针对目标细菌基因的反向互补序列的引物。
将主混合液分装到各试管中。
将含有细菌DNA模板的样品加入试管中。
将试管放入 LAMP 仪器中。
初始变性使引物能够与目标 DNA 结合。
当链置换DNA聚合酶开始合成新链时，它会置换原有的链，从而无需进行热循环。
由于反向互补配对，扩增产物形成环状结构。
该结构包含多个下一循环的起始位点，可实现目标 DNA 的指数级扩增。
染料与扩增的DNA结合并发出荧光。
实时监测荧光以检测样本中目标细菌基因的存在。
将用于配制LAMP预混液和添加DNA模板的区域进行物理分隔。
使用异丙醇和可降解DNA及DNase的溶液清洁工作台面。随后清洁移液器和试管条架。将等温扩增主混合液（Master Mix）、10倍浓度引物混合液（10X Primer Mix）、分子级水、阳性对照DNA以及DNA模板在室温下解冻。
打开LAMP仪器，并输入相关的样品信息。根据文稿说明配制LAMP预混液，涡旋混匀后短暂离心，将23 µL预混液分装至八联管条的每个孔中。对所有DNA模板进行涡旋振荡，并短暂离心。
然后，向相应的孔中加入 2 µL DNA 模板，并 tightly 封盖。从支架上取下管条，轻弹管条以确保所有试剂均汇集于管底。将管条放入 LAMP 仪器中，并启动 LAMP 运行。
LAMP 反应进行过程中，轻触温度、扩增和退火标签，以查看 LAMP 运行期间各种参数的动态变化。