0 次观看 • 3:24 分钟 • November 28th, 2025
从培养物开始 Myxococcus xanthus一种生长缓慢的土壤细菌。
将单菌落接种至含有抗生素的培养基中。
这些细胞经过基因改造，能够抵抗抗生素，从而确保只有目标细菌能够存活。
将悬液转移至含有培养基的较大烧瓶中，并在振荡条件下培养以促进最佳生长。
取一个安装在金属框上的盖玻片，以在成像过程中提供机械支撑。
将细菌培养物点样于其上，然后加入荧光微球，作为采集多张图像时图像配准的参考点。
放置一个含有培养基的预热琼脂糖垫，然后在其上覆盖盖玻片以保持湿润。
孵育以使细胞贴附于琼脂糖垫上。
培养垫为细胞提供营养，使研究人员能够在生长缓慢的细菌增殖过程中，对细胞活动进行长期的活细胞成像观察。
首先，在无菌离心管中，将单个M. xanthus菌落重悬于500 µL含抗生素的1% CTT培养基中，然后将全部悬液转移至含有5 mL 1% CTT培养基的50 mL锥形瓶中。通过将1 g琼脂糖与80 mL TPM缓冲液和20 mL 1% CTT培养基混合，配制含0.2% CTT的1%琼脂糖显微镜观察溶液。将该溶液放入微波炉加热，直至琼脂糖完全融化。
在培养皿中加入约 60 毫升熔化的琼脂糖，静置冷却至室温。使用前，将琼脂糖垫在 32 摄氏度下预热至少 15 分钟。接着，将无菌玻璃盖玻片放置在中间带有孔洞的塑料或金属支架上，然后用胶带将盖玻片固定在支架上。
将10至20微升指数生长期的M. xanthus细胞加入盖玻片上。如需添加荧光微球作为细胞的定位标记，可用TPM缓冲液将微球稀释至1:100。充分振荡微球悬浮液，然后取5至10微升加入细胞中。
从预先加热的大块1%琼脂糖垫中，切下一小块约与盖玻片大小相同的琼脂糖垫，将其放置在细胞上方。然后将盖玻片盖在琼脂糖垫上，以防止蒸发并保持细胞处于湿润环境中。将显微镜样品在32摄氏度下孵育15至20分钟，使细胞附着于琼脂糖垫底部，随后进行延时显微成像记录。